化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的兔外周血單個核采用取外周血,、通過密度梯度離心法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的兔外周血單個核經(jīng)過檢測,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔外周血單個核原代細(xì)胞 | 組織來源 | 血液組織 |
英文名稱 | Rabbit Peripheral Blood Mononuclear Cells | 貨號 | YS-01X7200 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔外周血單個核細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。外周血單個核細(xì)胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細(xì)胞,，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前,，主要的分離方法是密度梯度離心法,，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細(xì)胞,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 圓形
傳代特性 不增殖,；不傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;SH2 | 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4抗體 |
細(xì)胞膜調(diào)控蛋白Paralemmin 1抗體 | 電壓依賴性鈣通道CACNA1G+CACNA1H抗體 |
AKT相互作用蛋白蛋白抗體 | 酸化原活化蛋白激酶激酶1抗體 |
1號染色體開放閱讀框57抗體 | 吞噬細(xì)胞運動蛋白2抗體 |
2號染色體開放閱讀框49抗體 | 熱休克蛋白相關(guān)蛋白4抗體 |
IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | ACHE Others Mouse 小鼠 AcetylCHOlinesterase / ACHE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人肺間充質(zhì)干細(xì)胞裂解物HPMSCL | CL Others Human 人 CL-1 / CL / Chymoypsin-like protease 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
PAPPA2 Others Human 人 PAPPA2 / Pappalysin 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R108大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔外周血單個核原代細(xì)胞酸化原活化蛋白激酶激酶1抗體 |
JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM2 / CD322 / VE-JAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人癌細(xì)胞;MDA-MB-468 |
人口腔表皮樣癌細(xì)胞;KB | AtT-20小鼠垂體瘤細(xì)胞 AtT-20 mouse pituitary tumor cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
EPHA7 Others Human 人 EphA7 / EHK3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 |
腦特異性0脂酸酸酶樣蛋白1抗體 | CLU Others Mouse 小鼠 CLU / Clusterin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
嗜乳脂蛋白樣8抗體 | 一氧合成酶-3（內(nèi)皮型）抗體 |
胃泌素抑制肽抗體 | IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
化工儀器網(wǎng)