兔輸卵管上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 CHL(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) HeLa 人細(xì)胞 1ml/T75 Hep-2 人喉表皮癌細(xì)胞 SCaBER 人膀胱鱗癌細(xì)胞 小鼠原代腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔輸卵管上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔輸卵管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔輸卵管上皮細(xì)胞分離自輸卵管組織,；輸卵管位于子宮底兩側(cè)，包裹在子宮闊韌帶上緣內(nèi),。自子宮兩角分別伸展至左,、右卵巢，是輸送卵細(xì)胞進(jìn)入子宮的管道,，也是卵受精的場(chǎng)所,。輸卵管主要分漏斗部、壺腹部,、峽部和子宮部,，管壁均由粘膜、肌層和漿膜三層組成,。粘膜形成許多縱行而分支的皺襞,，壺腹部的皺襞發(fā)達(dá)，高而多分支,，故管腔不規(guī)則,；至子宮部的皺襞漸減少。粘膜上皮為單層柱狀,。由纖毛細(xì)胞和分泌細(xì)胞組成,。纖毛細(xì)胞以漏斗部和壺腹部多，至峽部和子宮部逐漸減少,，纖毛向子宮方向擺動(dòng),，使卵移向子宮并阻止病菌進(jìn)入腹膜腔.分泌細(xì)胞表面有微絨毛，頂部胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒,，其分泌物構(gòu)成輸卵管液,。輸卵管上皮細(xì)胞在卵巢雌激素和孕激素的作用下，隨月經(jīng)周期而有變化,。雌激素促進(jìn)輸卵管上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)的功能活動(dòng),，在子宮內(nèi)膜增生晚期（排卵前）。纖毛細(xì)胞變成高柱狀,，纖毛增多,，分泌細(xì)胞頂部充滿分泌顆粒，功能旺盛,。至分泌晚期,，兩種細(xì)胞均變矮,，分泌細(xì)胞的分泌顆粒排空，纖毛細(xì)胞的纖毛也減少,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

公司產(chǎn)品：