兔腎小管上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代口腔上皮細(xì)胞 BT-474(人導(dǎo)管癌細(xì)胞) Eca-109 人食管癌細(xì)胞 1ml/T75 H1299 人肺腺癌細(xì)胞 MKN45-PTBP3-pslience 空質(zhì)粒 人胃癌PTBP3空白對(duì)照細(xì)胞株 小鼠原代下頜骨成纖維細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜節(jié)采用-膠原酶聯(lián)合消化法，結(jié)合視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)和化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜節(jié)經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺(jué)層組成,，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細(xì)胞組成,，它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐,、視桿細(xì)胞層、外界膜,、外顆粒層,、外叢狀層、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層,、節(jié)細(xì)胞層、纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺(jué)層是由三個(gè)元組成。第一元是視細(xì)胞層,，專司感光,，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞,。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多,。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過(guò)雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來(lái)自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視到達(dá)出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng),。視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞貼壁后呈單層排列,，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，細(xì)胞呈圓形或橢圓形,，核圓且相對(duì)透明,，有些細(xì)胞膜上伸出短而小的突起；該細(xì)胞為高度分化細(xì)胞,，在體外屬于不增殖群,。視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞是青光眼病理性損害的主要細(xì)胞，視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的死亡可導(dǎo)致視功能不可逆損傷,，研究視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞損害的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)機(jī)制有利于青光眼發(fā)病機(jī)制的研究,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS,、B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

公司產(chǎn)品：