兔視網(wǎng)膜Muller原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代尿道上皮細(xì)胞 Calu-1(人肺癌細(xì)胞) BT-549 人導(dǎo)管癌細(xì)胞 1ml/T75 HEC-1-B 人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 U87-GFP 人腦膠質(zhì)瘤綠色熒光細(xì)胞 小鼠原代視網(wǎng)膜前體細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的兔視網(wǎng)膜Muller采用膠原酶消化法和反復(fù)消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔視網(wǎng)膜Muller經(jīng)GS免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細(xì)胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐,、視桿細(xì)胞層、外界膜,、外顆粒層,、外叢狀層、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層,、節(jié)細(xì)胞層、纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個元組成。第一元是視細(xì)胞層,，專司感光,，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多,。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視到達(dá)出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng),。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質(zhì)細(xì)胞,，大約占視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的90%，因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關(guān)注,。在超微結(jié)構(gòu)水平上,，Muller細(xì)胞的胞質(zhì)似乎比臨近的其他細(xì)胞更高的電子密度,，更發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),，細(xì)胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,，Muller細(xì)胞形態(tài)也會有所差異的,。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞是一種特化的膠質(zhì)細(xì)胞，不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能的作用,，并調(diào)制視網(wǎng)膜元活動,，還能參與多種病理過程，尤其是眼底增殖性病變,，如增生性體視網(wǎng)膜病變,、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等，體外培養(yǎng)Muller細(xì)胞是研究這些增殖性病變途徑之一,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：