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詳細(xì)介紹
兔食管上皮原代細(xì)胞
兔食管上皮細(xì)胞分離自食管組織,；食管是咽和胃之間的消化管,，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短,，隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降,，而逐漸增長(zhǎng),。食管可分為頸段、胸段和腹段,。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi),，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過(guò)程中,，食管的上皮細(xì)胞增殖,，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄,，甚至一度閉鎖,，以后管腔又重新出現(xiàn),。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中，黏膜層,，包括上皮,、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復(fù)層扁平上皮,，耐摩擦,，有保護(hù)作用。在食管與胃賁門(mén)交界處,，復(fù)層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮,。食管被一層線性排列的、無(wú)角化,、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋，其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障,，防止食管內(nèi)容物的滲入,。特別的是，層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動(dòng)的滲透壓之下,。從組織學(xué)上講,，食管上皮由兩層組成，基底層和分化層,；其中,，僅基底層的細(xì)胞可以增殖，然后向食管腔移行,。移行過(guò)程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá),。食管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機(jī)制和食管癌變機(jī)制的非常好的體外模型。
英文名稱 | Rabbit Esophageal Epithelial Cells | 組織來(lái)源 | 食管 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8115 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔食管上皮細(xì)胞
組織來(lái)源：食管
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔食管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔食管上皮采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔食管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 | 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FIG4抗體 |
谷氨轉(zhuǎn)移酶GMPS抗體 | 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 |
抗利尿激素1A抗體 | 延伸突觸蛋白3抗體 |
自噬相關(guān)蛋白4A抗體 | 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FIG4抗體 |
延伸突觸蛋白3抗體 | 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 |
TMED1 Others Human 人 TMED1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人肺泡上皮細(xì)胞HPAEpiC | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
PDCD1 Others Human 人 PD1 / PDCD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | VTCN1 Others Mouse 小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Hacat(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0352HFF-1(人成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 白牦牛皮膚細(xì)胞;Yak-2 | 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L2 大細(xì)胞肺癌細(xì)胞,，NCI-H661細(xì)胞 DSL-6A/C1細(xì)胞,，大鼠胰腺癌細(xì)胞株 |
CM-R124大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔食管上皮原代細(xì)胞延伸突觸蛋白3抗體 |
293T細(xì)胞，SV40永生化的人胚腎上皮細(xì)胞 蚊子細(xì)胞,C6/36細(xì)胞 CL-0250801-D (人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人類(lèi)成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN |
CL-0035BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | NPDC1 Others Human 人 NPDC-1 / NPDC1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人毛發(fā)干細(xì)胞(HHDPC)( 5×105 ) MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse | 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶7抗體 |
自噬相關(guān)蛋白4A抗體 | HLF細(xì)胞,，胚肺細(xì)胞 人前列腺上皮細(xì)胞,RWPE1細(xì)胞 人胚胎肌肉組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HSM-2 |
谷氨轉(zhuǎn)移酶GMPS抗體 | 抗利尿激素1A抗體 |
巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶7抗體 | TMED1 Others Human 人 TMED1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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