詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔腎足突采用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔腎足突原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腎 |
英文名稱 | Rabbit Renal Podocyte Cells | 貨號 | YS-01X8433 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
兔腎足突細(xì)胞分離自腎組織,;腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細(xì)血叢,被鮑氏囊所包裹,,是尿液形成的重要構(gòu)造,。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,,匯流入靜脈,,而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi),,微血管受到高壓,,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,,形成濾液,,滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,,腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率,。足細(xì)胞(podocyte)即腎小囊臟層上皮細(xì)胞,它附著于腎小球基底膜(GBM)的外側(cè),,連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障,。足細(xì)胞特殊的解剖位置,使得其體內(nèi)研究較為困難,;又由于正常成年機體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞,,體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀,,胞體較大,,由胞體伸出許多突起,又稱足突(FP),,呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面,,并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分,,IV型膠原和纖維連接蛋白(FN),;在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和組織蛋白酶,從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用,。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替,,形成了許多30-40nm的裂孔,孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜,,即腎小球足突間裂孔隔膜,。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的后屏障,對于維持腎小球濾過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用,。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔腎足突細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
小鼠T淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49) | 黃素腺嘌呤二核苷酸抗體 |
GDP甘露糖焦酸化酶B抗體 | 淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端) |
抗利尿激素受體1B抗體 | 原纖維蛋白2抗體 |
載脂蛋白A4抗體 | 黃素腺嘌呤二核苷酸抗體 |
原纖維蛋白2抗體 | 淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端) |
CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人肺泡上皮細(xì)胞RNAHPAEpiC miRNA5 μg | FCER1A Others Mouse 小鼠 FcERI / FCER1A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FAIM3 Others Human 人 FAIM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
LY9 Others Mouse 小鼠 Ly9 / CD229 / SLAMF3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R125大鼠牙細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔腎足突原代細(xì)胞原纖維蛋白2抗體 |
HAoSMC-c 人主動脈平滑肌細(xì)胞(HAoSMC) 500,000cells 胰島β細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | CM-H021人前列腺平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
HCT116/L 人結(jié)腸癌耐奧沙耐藥株 | SW 1271[SW-1271;SW1271]細(xì)胞,人肺腺癌細(xì)胞 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞,Caki-1細(xì)胞 人表皮黑色素細(xì)胞-HEM-a |
ERBB3 Others Mouse 小鼠 HER3 / ErbB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體 |
載脂蛋白A4抗體 | TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
GDP甘露糖焦酸化酶B抗體 | 抗利尿激素受體1B抗體 |
眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體 | CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |