兔腎小球系膜原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代卵巢上皮細(xì)胞 C2C12(小鼠成肌細(xì)胞) 293T/17 人胚細(xì)胞(SV40T基因修飾） 1ml/T75 HCC827 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 PC3-DR-luc-GPF 前列腺癌細(xì)胞 小鼠原代外周血粒細(xì)胞

兔腎小球系膜原代細(xì)胞

兔腎小球系膜細(xì)胞分離自腎小球組織,；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈,，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi),，微血管受到高壓,，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,，形成濾液,，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率,。腎小球系膜是位于腎小球毛細(xì)血管袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)組成,。腎小球系膜細(xì)胞是腎小球內(nèi)非?；钴S的細(xì)胞，具有分泌細(xì)胞基質(zhì),、產(chǎn)生細(xì)胞因子,、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細(xì)胞收縮的功能,。腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)是研究系膜擴(kuò)張,、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法,。系膜細(xì)胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動(dòng)脈和出球動(dòng)脈的收縮作用受系膜細(xì)胞的調(diào)節(jié),，以影響毛細(xì)血管袢的內(nèi)壓和濾過率,；②支持作用，它填充于毛細(xì)血管袢之間,，支持毛細(xì)血管的位置,；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì),；④分泌腎素,，在腎缺血或免疫復(fù)合物沉積時(shí)，系膜細(xì)胞增生且分泌腎素,。

產(chǎn)品名稱：兔腎小球系膜細(xì)胞

組織來源：腎

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔腎小球系膜細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎小球系膜采用機(jī)械研磨法結(jié)合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎小球系膜經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。