兔神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代肌源性干細(xì)胞 Bcap-37(人癌細(xì)胞) MGC-803 人胃癌細(xì)胞 1ml/T75 DU 145 人前列腺癌細(xì)胞 U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 Human 小鼠原代牙乳頭細(xì)胞

兔神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞

兔小膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織,；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,，它是元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面,，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積),；半球表面有很多深淺不等的溝或裂,，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積,；大腦外側(cè)面重要的溝,、裂有大腦外側(cè)裂,、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,，使大腦皮質(zhì)組分為額葉,、頂葉、顳葉,、枕葉四大部分,。小膠質(zhì)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞的一種，相當(dāng)于腦和脊髓中的巨噬細(xì)胞,，是中樞系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是主要的一道免疫防線,。小膠質(zhì)細(xì)胞大約占大腦中的膠質(zhì)細(xì)胞的20%，小膠質(zhì)細(xì)胞不停地清除著中樞系統(tǒng)中的損壞的,，斑塊及感染性物質(zhì),。無(wú)數(shù)臨床上和病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細(xì)胞在退化類疾病的發(fā)病機(jī)理中起到十分重要的作用，如帕金森病,、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等,。但是過(guò)多激活或失控的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)引起毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來(lái)源,，如腫瘤壞死因子(TNF),，一氧化氮，白介素等有毒性的物質(zhì),。小膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能：①膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過(guò)程中,；②當(dāng)程序性細(xì)胞死亡時(shí)，或在大腦發(fā)育的過(guò)程中,，中樞系統(tǒng)受損或受到病理?yè)p壞時(shí),，膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細(xì)胞；③膠質(zhì)細(xì)胞能在Ⅱ類組織相容性復(fù)合體表達(dá)CD-4陽(yáng)性T細(xì)胞時(shí)表達(dá)抗原,，能進(jìn)行Fc介導(dǎo)的巨噬作用,，并且與造血細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織共享抗原。

產(chǎn)品名稱：兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞

組織來(lái)源：腦

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：（12mM）

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔小膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔小膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法，在培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)缺失數(shù)天后經(jīng)搖床震蕩收集脫落細(xì)胞制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔小膠質(zhì)經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。