兔三叉神經(jīng)元原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代虹膜色素上皮細(xì)胞 AtT-20(小鼠垂體瘤細(xì)胞) HPASMC 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 1ml/T75 Daudi 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 QGY-7701, 人肝癌細(xì)胞 Human 小鼠原代牙周膜成纖維細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔三叉元采用消化法結(jié)合元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔三叉元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔三叉元細(xì)胞分離自三叉組織,；三叉為粗大的混合性腦,，含一般軀體感覺(jué)和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉運(yùn)動(dòng)核,，纖維組成三叉運(yùn)動(dòng)根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺(jué)根下內(nèi)側(cè),，后進(jìn)入三叉第3支下頜中,，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜分支分布于咀嚼肌等,。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉中腦核有關(guān)的纖維,，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺(jué)。三叉內(nèi)以軀體感覺(jué)纖維為主,，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉節(jié)（半月節(jié)）內(nèi),，該節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹,。三叉節(jié)由假單極元組成,，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉感覺(jué)根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦,，止于三叉諸感覺(jué)核,，其中傳導(dǎo)痛溫覺(jué)的纖維主要終止于三叉脊束核；傳導(dǎo)觸覺(jué)的纖維主要終止于三叉腦橋核,。三叉節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉三大分支,，即第1支眼、第2支上頜,、第3支為下頜,。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi),、口腔,、鼻腔、鼻旁竇的粘膜,、牙,、腦膜等，傳導(dǎo)痛,、溫,、觸等多種感覺(jué)。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔三叉元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：