詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的兔乳腺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的兔乳腺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔乳腺成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 乳腺組織 |
英文名稱 | Rabbit Mammary Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7102 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
兔乳腺成纖維細(xì)胞分離自乳腺組織,;乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔,,一端連于胸肌筋膜,,另一端連于皮膚,將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長,、功能分化和退化過程的器官之一。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間,,形成許多間隔,,這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用,而纖維結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成的,。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的乳腺成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,,胞核清晰,分布較均勻,,散在生長,,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,,呈橢圓形,顏色淡,。細(xì)胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán),。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品:
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株 母細(xì)胞瘤細(xì)胞,LAN-5細(xì)胞 PA317(鼠胚胎成纖維細(xì)胞) | 酸化細(xì)胞核因子抗體 |
酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 | 轉(zhuǎn)移生長因子β3(TGFβ3)抗體 |
腫瘤抑制因子FBW7抗體 | 酸化熱休克蛋白-70抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 | 酸化細(xì)胞核因子抗體 |
酸化熱休克蛋白-70抗體 | 轉(zhuǎn)移生長因子β3(TGFβ3)抗體 |
小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞;P815 | CL-0358HKC(人胚腎上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人胰腺癌細(xì)胞;AsPC-1 大鼠皮膚肥大細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EMT-6 小鼠癌 |
CL-0413PC-3M-2B4(人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株)5×106cells/瓶×2 | 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;HuT 78 |
CM-M049小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 人心肌細(xì)胞-裂解物HCM-a L |
人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞,,HSF細(xì)胞 NOR-10(小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞) | 兔乳腺成纖維原代細(xì)胞酸化熱休克蛋白-70抗體 |
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞;RPMI-8226 [RPMI8826] | ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H135人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] | 酸化周期素E2抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 | 大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 | 腫瘤抑制因子FBW7抗體 |
酸化周期素E2抗體 | 小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞;P815 |