詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的兔乳腺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的兔乳腺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔乳腺成纖維原代細胞 | 組織來源 | 乳腺組織 |
英文名稱 | Rabbit Mammary Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7102 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔乳腺成纖維細胞分離自乳腺組織;乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,,淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔,,一端連于胸肌筋膜,另一端連于皮膚,,將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長、功能分化和退化過程的器官之一,。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間,形成許多間隔,,這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用,,而纖維結(jié)締組織是由成纖維細胞構(gòu)成的。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長,不聚集成團,;細胞生長迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,,平坦、胞體較大,,細胞質(zhì)透明,,細胞核較大,呈橢圓形,,顏色淡,。細胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
細胞培養(yǎng)方法:
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品:
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株 母細胞瘤細胞,LAN-5細胞 PA317(鼠胚胎成纖維細胞) | 酸化細胞核因子抗體 |
酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 | 轉(zhuǎn)移生長因子β3(TGFβ3)抗體 |
腫瘤抑制因子FBW7抗體 | 酸化熱休克蛋白-70抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 | 酸化細胞核因子抗體 |
酸化熱休克蛋白-70抗體 | 轉(zhuǎn)移生長因子β3(TGFβ3)抗體 |
小鼠肥大細胞瘤細胞;P815 | CL-0358HKC(人胚腎上皮細胞)5×106cells/瓶×2 |
人胰腺癌細胞;AsPC-1 大鼠皮膚肥大細胞培養(yǎng)基 100mL | EMT-6 小鼠癌 |
CL-0413PC-3M-2B4(人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細胞株)5×106cells/瓶×2 | 人T淋巴細胞白血病細胞;HuT 78 |
CM-M049小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 人心肌細胞-裂解物HCM-a L |
人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞 人皮膚成纖維細胞,HSF細胞 NOR-10(小鼠骨骼肌成纖維細胞) | 兔乳腺成纖維原代細胞酸化熱休克蛋白-70抗體 |
人多發(fā)性骨髓瘤細胞;RPMI-8226 [RPMI8826] | ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H135人脈絡(luò)膜微血管細胞培養(yǎng)基100mL |
人結(jié)直腸腺癌細胞;SW620 [SW 620;SW-620] | 酸化周期素E2抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 | 大鼠小腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 | 腫瘤抑制因子FBW7抗體 |
酸化周期素E2抗體 | 小鼠肥大細胞瘤細胞;P815 |