詳細(xì)介紹
兔全骨髓原代細(xì)胞
兔全骨髓細(xì)胞分離自骨髓,;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用,,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌,、病毒等,;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,骨髓不但是造血器官,,它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,,是一種海綿狀的組織,,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱(chēng)為紅骨髓,。出生時(shí),,紅骨髓充滿(mǎn)全身骨髓腔,隨著年齡增大,,脂肪細(xì)胞增多,,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。全骨髓細(xì)胞即骨髓內(nèi)除紅細(xì)胞外的全部細(xì)胞,。
英文名稱(chēng) | Rabbit Whole Bone Marrow Cells | 組織來(lái)源 | 骨髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8419 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng):兔全骨髓細(xì)胞
組織來(lái)源:骨髓
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔全骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔全骨髓細(xì)胞采用沖洗骨髓,、紅細(xì)胞裂解法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔全骨髓經(jīng)過(guò)檢測(cè),,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過(guò)表達(dá));LA1-VAP33-GFP | FAM129B蛋白抗體 |
核苷酸結(jié)合蛋白2抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體 |
腺苷三酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體9抗體 | FK506結(jié)合蛋白38抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶9抗體 | FAM129B蛋白抗體 |
FK506結(jié)合蛋白38抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體 |
EPD5 Others Human 人 EPD5 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞;AE1201 | 人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞(HCSMC)(5×105 ) |
EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | ADAMTSL1 Others Human 人 ADAMTSL1 / PUNCTIN 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
FGFR4 Others Human 人 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 家豬皮膚細(xì)胞;SSC-S1 癌細(xì)胞,,ZR-75-1細(xì)胞 NS1細(xì)胞,小鼠骨髓瘤細(xì)胞 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-29 | 兔全骨髓原代細(xì)胞FK506結(jié)合蛋白38抗體 |
293T/17細(xì)胞,,SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系) 鼠小腦細(xì)胞,C8-D1A細(xì)胞 CL-0259BC-020(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK |
人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
ESAM Others Human 人 ESAM 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 核仁纖維蛋白抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶9抗體 | K-562人慢性髓原白血病細(xì)胞 K-562 chronic myelogenous leukemia cells 1640+10% FBS |
核苷酸結(jié)合蛋白2抗體 | 腺苷三酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體9抗體 |
核仁纖維蛋白抗體 | EPD5 Others Human 人 EPD5 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過(guò)夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類(lèi),;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。