兔前列腺平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞 A549(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 系膜細(xì)胞 CFPAC-1 人胰腺癌細(xì)胞 6-10B, 人鼻咽癌細(xì)胞系 Human 小鼠原代脂肪干細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔前列腺平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔前列腺平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

兔前列腺平滑肌細(xì)胞分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官,；前列腺是不成對的實(shí)質(zhì)性器宮,，由腺組織和肌組織構(gòu)成。前列腺如栗子,，底朝上,，與膀胱相貼，尖朝下,，抵泌尿生殖膈,，前面貼恥骨聯(lián)合，后面依直腸,。前列腺腺體的中間有尿道穿過,，扼守著尿道上口，所以,，前列腺有問題時(shí),，排尿首先受影響。前列腺是機(jī)體非常少有的,，具有內(nèi),、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺,，前列腺每天分泌前列腺液,，是構(gòu)成精液主要成分；作為內(nèi)分泌腺,，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素",。前列腺平滑肌細(xì)胞是前列腺的重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一,，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。前列腺平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔前列腺平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：