詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔脾淋巴采用機械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為1×106cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔脾淋巴經(jīng)過檢測,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔脾淋巴原代細胞 | 組織來源 | 脾臟 |
英文名稱 | Rabbit Spleen Lymphocyte Cells | 貨號 | YS-01X7818 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔脾淋巴細胞分離自脾臟組織;脾臟是機體大的免疫器官,,占全身淋巴組織總量的25%,,含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞,是機體細胞免疫和體液免疫的中心,。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處,,與9-11肋相對,長軸與第10肋一致,。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰,,前方有胃,后方與左腎,、左腎上腺毗鄰,,下端與結(jié)腸脾溝相鄰,地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞器官,。淋巴細胞(lymphocyte)白細胞的一種,,由淋巴器官產(chǎn)生,機體免疫應(yīng)答功能的重要細胞成分,。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異,,可分為中樞淋巴器官(又名初級淋巴器官)和周圍淋巴器官(又名次級淋巴器官)兩類。前者包括胸腺,、腔上囊或其相當器官(有人認為在哺乳動物是骨髓),。它們無須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細胞,成熟后將其轉(zhuǎn)送至周圍淋巴器官,。后者包括脾,、淋巴結(jié)等。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖,,繼而發(fā)揮其免疫功能,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態(tài):圓形
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔脾淋巴細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
A498-EGFP-puro人腎癌細胞 Human renal cell carcinoma A498-EGFP-puro cells DMEM+10% FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin | 酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 |
酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體 | 轉(zhuǎn)醛醇酶抗體 |
腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53) | 酸化葡萄糖合成酶1抗體 |
主導控制樣蛋白1抗體 | 酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 |
酸化葡萄糖合成酶1抗體 | 轉(zhuǎn)醛醇酶抗體 |
GDF15 Protein Human 重組人 GDF-15 蛋白 (Fc 標簽) | 中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I |
SMC-1細胞,,胸膜細胞瘤 早幼粒急性白血病細胞系,HL-60細胞 小鼠子細胞;U14 | 小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP |
人子宮內(nèi)膜上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | CXCL9 Protein Mouse 重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 |
Caco-2 人結(jié)直腸腺癌細胞 | 人肝臟細胞裂解物HHL |
FO細胞,小鼠骨髓瘤細胞 3T6-Swiss albino(胚胎成纖維細胞) 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304] | 兔脾淋巴原代細胞酸化葡萄糖合成酶1抗體 |
人低分化肺腺癌細胞;GLC-82 [GLC82] | PK-15(豬腎細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured) |
THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H129人視網(wǎng)膜色素上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
TNFSF11 Protein Mouse 重組小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽) | 酸化腫瘤血管內(nèi)皮標志物8抗體 |
主導控制樣蛋白1抗體 | L132 人肺上皮細胞 |
酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體 | 腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53) |
酸化腫瘤血管內(nèi)皮標志物8抗體 | GDF15 Protein Human 重組人 GDF-15 蛋白 (Fc 標簽) |