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詳細(xì)介紹
兔皮膚肥大原代細(xì)胞
兔皮膚肥大細(xì)胞分離自皮膚組織,；皮膚肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚微血管周圍,，分泌多種細(xì)胞因子,，參與免疫調(diào)節(jié)（T細(xì)胞,、B細(xì)胞,、APC細(xì)胞活化）,。皮膚肥大細(xì)胞表達(dá)MHC分子、B7分子,，具有APC功能,。表達(dá)大量的IgE-Fc受體，釋放過敏介質(zhì),。具有弱吞噬功能,，和血液的嗜堿粒細(xì)胞同樣，具有強(qiáng)嗜堿性顆粒的組織細(xì)胞,。存在于血液中的這類顆粒,，含有肝素、組織胺,、5-羥色胺,，由細(xì)胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì)，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應(yīng)（炎癥）,。由于在肥大細(xì)胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸,，使細(xì)胞多陷于崩壞。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形,，細(xì)胞核小,，呈圓形或橢圓形，染色淺,，位于細(xì)胞中央,。細(xì)胞常成堆或單個(gè)分布于血管附近。細(xì)胞呈圓形或卵圓形,，細(xì)胞質(zhì)中充滿大小一致,、染成藍(lán)紫色的顆粒，均勻分布在核周圍,。
英文名稱 | Rabbit Skin Mast Cells | 組織來源 | 皮膚 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8409 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔皮膚肥大細(xì)胞
組織來源：皮膚
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔皮膚肥大細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮膚肥大采用膠原酶-混合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮膚肥大經(jīng)CD117免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205 大鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 |
酸化核糖體S6K2蛋白激酶抗體 | 轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體 |
腫瘤抑制基因LUCA15抗體 | 酸化皮層肌動蛋白抗體 |
豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K99抗體 | 酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 |
酸化皮層肌動蛋白抗體 | 轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體 |
MLA144 MLA144長臂猿淋巴瘤細(xì)胞 | CL-0310VE(人血管內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞 人單核細(xì)胞型淋巴瘤，THP1細(xì)胞 GC-2spd(ts)(小鼠精母細(xì)胞) | 綠色熒光蛋白標(biāo)記人胃癌細(xì)胞;MGC803-GFP |
CL-0408NEC(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 團(tuán)頭魴尾鰭細(xì)胞;WCF |
U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | BEL-7405(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
HepII細(xì)胞,，猴腎細(xì)胞 人白血病阿耐藥株,K562/Adr細(xì)胞 人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38] | 兔皮膚肥大原代細(xì)胞酸化皮層肌動蛋白抗體 |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A | TNFRSF1B Others Human 人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B (aa 1-268, 196 Met/Arg) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Raji細(xì)胞,，人Butt`s淋巴瘤細(xì)胞 C57小鼠黑色素瘤瘤株,ME細(xì)胞 人腎近曲小管上皮細(xì)胞裂解物HRPTEpiCL | 人髓核細(xì)胞HNPC |
SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系);293T/17 | 酸化中心粒蛋白Nudel抗體 |
豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K99抗體 | SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系 |
酸化核糖體S6K2蛋白激酶抗體 | 腫瘤抑制基因LUCA15抗體 |
酸化中心粒蛋白Nudel抗體 | MLA144 MLA144長臂猿淋巴瘤細(xì)胞 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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