兔皮層神經(jīng)元原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代棕色前脂肪細胞 小鼠海馬膠質(zhì)細胞（EGFP標記） Mouse 人結(jié)腸癌組織源細胞培養(yǎng)試劑盒 人結(jié)腸癌組織源細胞培養(yǎng) 小鼠氣管和支氣管上皮細胞培養(yǎng)基 100mL 腸粘膜上皮細胞 大鼠原代腸黏膜上皮細胞

兔皮層神經(jīng)元原代細胞

兔皮層元細胞分離自腦皮層組織,；皮層元細胞是構(gòu)成中樞系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,。元是具有長突觸(軸突)的細胞,，它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘,，組成纖維,，它的末端的細小分支叫做末梢。細胞體位于腦,、脊髓和節(jié)中,，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分,，其形狀大小有很大差別,，直徑約4-120微米。核大而圓,，位于細胞中央,，染色質(zhì)少，核仁明顯,。細胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì),，還有許多元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分,，又可分為樹突和軸突,。每個元可以有一或多個樹突,，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個元只有一個軸突,，可以把興奮從胞體傳送到另一個元或其他組織,，如肌肉或腺體。皮質(zhì)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細胞之一,，是大腦進行功能活動調(diào)節(jié)的基本單位,，參與動物多種中樞系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學觀察顯示元從貼壁,、伸出突起開始,；突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網(wǎng),，同時細胞胞體增大,，周邊光暈明顯。10-12d細胞為豐滿,，隨后元開始裂解,，突起逐漸減少，細胞已退化變性,，輪廓模糊,，光暈消失，細胞變形,。

產(chǎn)品名稱：兔皮層神經(jīng)元細胞

組織來源：腦

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：元細胞樣

傳代特性：屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.125%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔皮層元細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的兔皮層元采用消化法、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔皮層元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。