兔皮層神經(jīng)元原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代棕色前脂肪細(xì)胞 小鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記） Mouse 人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 腸粘膜上皮細(xì)胞 大鼠原代腸黏膜上皮細(xì)胞

兔皮層神經(jīng)元原代細(xì)胞

兔皮層元細(xì)胞分離自腦皮層組織；皮層元細(xì)胞是構(gòu)成中樞系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,。元是具有長(zhǎng)突觸(軸突)的細(xì)胞,，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長(zhǎng)的軸突上套有一層鞘,，組成纖維,，它的末端的細(xì)小分支叫做末梢。細(xì)胞體位于腦,、脊髓和節(jié)中,，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細(xì)胞體是細(xì)胞含核的部分,，其形狀大小有很大差別,，直徑約4-120微米。核大而圓,，位于細(xì)胞中央,，染色質(zhì)少,，核仁明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì),，還有許多元纖維,。細(xì)胞突起是由細(xì)胞體延伸出來(lái)的細(xì)長(zhǎng)部分，又可分為樹(shù)突和軸突,。每個(gè)元可以有一或多個(gè)樹(shù)突,，可以接受刺激并將興奮傳入細(xì)胞體。每個(gè)元只有一個(gè)軸突,，可以把興奮從胞體傳送到另一個(gè)元或其他組織,，如肌肉或腺體。皮質(zhì)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細(xì)胞之一,，是大腦進(jìn)行功能活動(dòng)調(diào)節(jié)的基本單位,，參與動(dòng)物多種中樞系統(tǒng)疾病的病理過(guò)程。通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察顯示元從貼壁,、伸出突起開(kāi)始,；突起逐漸增多，而后突起進(jìn)一步增多并逐漸成網(wǎng),，同時(shí)細(xì)胞胞體增大,，周邊光暈明顯。10-12d細(xì)胞為豐滿,，隨后元開(kāi)始裂解,，突起逐漸減少，細(xì)胞已退化變性,，輪廓模糊,，光暈消失，細(xì)胞變形,。

產(chǎn)品名稱：兔皮層神經(jīng)元細(xì)胞

組織來(lái)源：腦

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.125%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔皮層元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮層元采用消化法、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔皮層元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。