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詳細介紹
兔胚胎成纖維原代細胞
兔胚胎成纖維細胞分離自胚胎,；成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細胞,，能產(chǎn)生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子,，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子,，而且可以為ES細胞的培養(yǎng)提供類似于體內的微環(huán)境,，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用。
英文名稱 | Rabbit Embryonic Fibroblast Cells | 組織來源 | 胚胎 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7890 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔胚胎成纖維細胞
組織來源：胚胎
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔胚胎成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔胚胎成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔胚胎成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
HFL1人胚肺成纖維細胞 HFL1 in human embryo lung fibroblasts F12K培養(yǎng)基+10%FBS | 酸化細胞分化周期CDC42蛋白抗體 |
酸化核基質結合區(qū)結合蛋白1抗體 | 轉錄中介因子Tif1γ抗體 |
腫瘤抑制基因LATS1抗體 | 酸化膀癌缺失基因1抗體 |
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型衣殼蛋白抗體 | 酸化細胞分化周期CDC42蛋白抗體 |
酸化膀癌缺失基因1抗體 | 轉錄中介因子Tif1γ抗體 |
SCGB1A1 Protein Mouse 重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 標簽) | 獼猴皮膚細胞;MMS7 |
LOVE1細胞,，結直腸癌細胞 人黑色素瘤細胞,B16細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;HH-29 | HCC827(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0399NCI-H295R(人腎上腺皮質腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 | CBRH-7919 大鼠肝癌細胞 |
MDA-MB-415 人腺癌細胞 | 人肝竇內皮細胞裂解物HHSECL |
人前列腺癌高轉移細胞株;PC-3M IE8 大鼠骨細胞培養(yǎng)基 100mL | 兔胚胎成纖維原代細胞酸化膀癌缺失基因1抗體 |
心肌成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人細胞裂解液 (陽性對照) |
PDGFC Others Human 人 PDGF-C / SCDGF 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H127人晶狀體上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 | 酸化指狀蛋白RET抗體 |
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型衣殼蛋白抗體 | 人表皮角質形成細胞培養(yǎng)基 100mL |
酸化核基質結合區(qū)結合蛋白1抗體 | 腫瘤抑制基因LATS1抗體 |
酸化指狀蛋白RET抗體 | SCGB1A1 Protein Mouse 重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 標簽) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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