兔胚肝間充質(zhì)干原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代滋養(yǎng)層干細(xì)胞 人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪 Human 人胎兒真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人胎兒真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 腮腺細(xì)胞 大鼠原代腓腸肌細(xì)胞

兔胚肝間充質(zhì)干原代細(xì)胞

兔胚肝間充質(zhì)干細(xì)胞分離自胚胎肝組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞,。在不同的誘導(dǎo)條件下,，可分化為多種造血細(xì)胞以外的組織細(xì)胞，并具有造血支持,、免疫調(diào)節(jié),、組織修復(fù)等作用。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,，存在于骨髓,、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織,。它可分泌多種細(xì)胞因子及生長因子,，促進(jìn)造血干細(xì)胞（HSC）的增殖與分化。MSCs還具有免疫調(diào)節(jié),、抗炎和組織修復(fù)作用,，可減輕移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相關(guān)并發(fā)癥,。胚胎肝非實質(zhì)細(xì)胞中含有MSC,，且量較大，可成為種子細(xì)胞,。

產(chǎn)品名稱：兔胚肝間充質(zhì)干細(xì)胞

組織來源：胚胎肝

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS,、EGF、bFGF,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔胚肝間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的兔胚肝間充質(zhì)干采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔胚肝間充質(zhì)干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。