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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔胚成纖維采用消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔胚成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔胚成纖維原代細胞 | 組織來源 | 胚胎 |
英文名稱 | Rabbit Embryonic Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8403 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔胚成纖維細胞分離自胚胎,；成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質(zhì)透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。該細胞常用作ES細胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細胞,，能產(chǎn)生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性,，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子,，而且可以為ES細胞的培養(yǎng)提供類似于體內(nèi)的微環(huán)境，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、bFGF、Insulin,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔胚成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
小鼠海馬膠質(zhì)細胞(EGFP標(biāo)記) | FAM161B蛋白抗體 |
高爾基體0蛋白6抗體 | 酰基A脫氫酶長鏈抗體 |
β淀粉樣肽/Aβ42抗體 | 凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 |
ADP核糖基化樣因子ARL3抗體 | FAM161B蛋白抗體 |
凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 | ?；?span>A脫氫酶長鏈抗體 |
LIF Others Human 人 LIF 人細胞裂解液 (陽性對照) | EFNB1 Others Mouse 小鼠 EFNB1 / Ephrin-B1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肝細胞cDNAHH cDNA | CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細胞裂解液 (陽性對照) |
DKK1 Others Human 人 DKK1 / Dkk-1 人細胞裂解液 (陽性對照) | KLRB1A Others Mouse 小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IL7R Others Human 人 IL7Ra / CD127 人細胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H1N3 甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0902 | 兔胚成纖維原代細胞凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 |
BT-474(人導(dǎo)管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M085小鼠表皮角化細胞培養(yǎng)基100mL 人Burkkit淋巴瘤細胞;Daudi | 貓星形腦膠質(zhì)細胞;PG-4(S+L-) |
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino | 羅猴胎腎細胞;MA104 腦膠質(zhì)瘤細胞,，C6細胞 NCI-H446 [H446](小細胞肺癌細胞) |
SIGLEC5 Others Human 人 SIGLEC5 人細胞裂解液 (陽性對照) | 羊抗纖維蛋白原抗體 |
ADP核糖基化樣因子ARL3抗體 | BC-009(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎足細胞;Mouse podocyte |
高爾基體0蛋白6抗體 | β淀粉樣肽/Aβ42抗體 |
羊抗纖維蛋白原抗體 | LIF Others Human 人 LIF 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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