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詳細(xì)介紹
兔膀胱移行上皮原代細(xì)胞
兔膀胱移行上皮細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官,，在哺乳類動物,，它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi),，其后端開口與尿道相通,。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出,。膀胱壁由三層組織組成,，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜,。膀胱內(nèi)表面黏膜層的上皮細(xì)胞均為移行上皮細(xì)胞,，所以膀胱黏膜上皮又叫膀胱移行上 皮。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成,，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮,，可使膀胱內(nèi)壓升高,，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,，形成尿道內(nèi)括約肌,。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出,。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）,、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）,。其主要作用有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子,；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,，進(jìn)而影響腎臟病變。
英文名稱 | Rabbit Bladder Transitional Epithelial Cells | 組織來源 | 膀胱 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8402 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔膀胱移行上皮細(xì)胞
組織來源：膀胱
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔膀胱移行上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔膀胱移行上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔膀胱移行上皮經(jīng)Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
MDCK細(xì)胞,，狗腎細(xì)胞 人結(jié)腸癌細(xì)胞,RKO細(xì)胞 CM-H101新生兒表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 酸化細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體 |
酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 PPARγ | 轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體 |
腫瘤抑制蛋白18抗體 | 酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 |
豬胰島素單克隆抗體 | 酸化細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體 |
酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 | 轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體 |
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 | 荷蘭黑白花奶牛牛肺細(xì)胞;DCL1 |
T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795 小鼠腎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞 Human |
CL-0401NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 草魚腎細(xì)胞;GIK |
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA | CL-0152MDA-MB-453(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
MDBK細(xì)胞,，牛腎細(xì)胞 人慢性髓原白血病細(xì)胞,K562細(xì)胞 人胚胎，皮膚,，肌肉;M-22 | 兔膀胱移行上皮原代細(xì)胞酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+ | PC-3細(xì)胞,，人胰腺癌細(xì)胞 人表皮癌細(xì)胞,A-431細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;BALB/C 3T3 |
IL13RA1 Others Human 人 IL13Ra1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人前列腺癌細(xì)胞;DU 145 [DU145;DU-145] |
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 | 酸化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體 |
豬胰島素單克隆抗體 | 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-SH |
酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 PPARγ | 腫瘤抑制蛋白18抗體 |
酸化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體 | 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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