化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔尿道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔尿道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔尿道上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 尿道 |
英文名稱 | Rabbit Urethral Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8400 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔尿道上皮細(xì)胞分離自尿道管組織,；尿道是從膀胱通向體外的管道。尿道上皮細(xì)胞主要功能：①尿道上皮細(xì)胞排列在膀胱表面,，它是由高可塑性和具有多種功能特殊類型的細(xì)胞組成,；②上皮細(xì)胞組成膀胱的防御系統(tǒng)與病原體接觸，它們具有多種防御機(jī)制來(lái)阻止病原體粘著,，保持泌尿器溶解物的不滲透性,；③膀胱上皮細(xì)胞表達(dá)雌激素α、β受體,，上皮生長(zhǎng)因子受體和纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體,，在損傷和感染時(shí)，這些受體對(duì)膀胱上皮細(xì)胞起著重要作用,；④能釋放許多細(xì)胞因子,、免疫系統(tǒng)介質(zhì)。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔尿道上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞，PT67細(xì)胞 P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](骨髓瘤細(xì)胞) | 酸化細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體 |
酸化谷受體2抗體 | 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 |
腫瘤異常甲基化蛋白2抗體 | 酸化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體 |
病毒抗體 | 酸化細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體 |
酸化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體 | 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 |
人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株;Mo7e | PA319 人大腸癌細(xì)胞 |
CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) |
CL-0397NCI-H23(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人前列腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M IE8 |
原代軟骨細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1ml | 兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞;RCBBF |
人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株,，293001B細(xì)胞 NCI-H520 [H520](人肺癌細(xì)胞) | 兔尿道上皮原代細(xì)胞酸化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體 |
ANGPTL7 Protein Canine 重組狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | ALDH3A1 Others Human 人 ALDH3A1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CoC1/DDP細(xì)胞,，CoC1細(xì)胞耐藥亞株 分泌A2抗體B淋巴細(xì)胞,BB7.2細(xì)胞 615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株;L7712 | 人顱骨成骨細(xì)胞HCO |
SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系 | 酸化整合素β4抗體 |
病毒抗體 | Daudi(人淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
酸化谷受體2抗體 | 腫瘤異常甲基化蛋白2抗體 |
酸化整合素β4抗體 | 人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株;Mo7e |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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