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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔腦膜成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的兔腦膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產品名稱 | 兔腦膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 腦膜 |
英文名稱 | Rabbit Meningeal Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8398 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔腦膜細胞分離自腦膜組織,；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層,，由外向內為硬腦膜,、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。硬腦膜,，是一厚而堅韌的雙層膜,，外層是顱骨內面的骨膜，僅疏松地附于顱蓋,，特別是在枕部與顳部附著更疏松,，稱為骨膜層。蛛網(wǎng)膜是一層半透明的膜,，位于硬腦膜深部,，其間有潛在性腔隙為硬腦膜下隙。軟腦膜是緊貼于腦表面的一層透明薄膜,，并伸入溝裂,。在腦室壁的某些部位，軟腦膜及其血管與室管膜上皮共同形成脈絡組織,。脈絡組織中的血管反復分支成叢,，突入腦室形成脈絡叢。腦膜細胞圍繞著大腦，參與中樞系統(tǒng)的正常發(fā)育,，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細胞外基質,、組織放射狀膠質細胞網(wǎng)絡和小腦皮層分層結構。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右,；1-2代以內狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔腦膜成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側,，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產品：
小鼠黑色素瘤細胞;B16-F1 | FRMD3蛋白抗體 |
GADD153抗體 | 轉化生長因子β誘導蛋白3抗體（半和絲富含核蛋白1） |
心肌錨蛋白重復結構域1抗體 | 肌動蛋白結合蛋白Fascin抗體 |
血管生成素樣蛋白3抗體 | FRMD3蛋白抗體 |
肌動蛋白結合蛋白Fascin抗體 | 轉化生長因子β誘導蛋白3抗體（半和絲富含核蛋白1） |
CD80 Others Mouse 小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD70 Others Human 人 CD70 / CD27L / TNFSF7 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肝永生化細胞;THLE-3 | 大鼠腦膜細胞(RMC)(5×105) |
RSC96(大鼠雪旺細胞) 5×106cells/瓶×2 人 SLC27A4 / FATP4 人細胞裂解液 (陽性對照) | PGF Others Mouse 小鼠 PIGF / PLGF 人細胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0923 人腦動脈血管內皮細胞培養(yǎng)基 100mL | HCAEC人冠狀動脈內皮細胞 HCAEC in human coronary artery endothelial cells ECM(Sicencell Cat#1001) |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0907 | 兔腦膜成纖維原代細胞肌動蛋白結合蛋白Fascin抗體 |
T24人膀胱移行細胞癌細胞 T24 human bladder ansitional cell carcinoma cell 1640+10% FBS | 人晶體上皮細胞永生系;SRA01/04(HLE) |
JAR 人胎盤絨毛癌細胞 | LILRB3 Others Mouse 小鼠 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) | 脆性X相關蛋白樣2抗體 |
血管生成素樣蛋白3抗體 | 小鼠胚胎成纖維細胞;PA317 小鼠小腸平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
GADD153抗體 | 心肌錨蛋白重復結構域1抗體 |
脆性X相關蛋白樣2抗體 | CD80 Others Mouse 小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 人細胞裂解液 (陽性對照) |
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