詳細介紹
兔腦動脈血管平滑肌原代細胞
兔腦動脈血管平滑肌細胞分離自腦動脈組織,;腦動脈有成對的頸內(nèi)動脈和椎動脈互相銜接成動脈循環(huán);靜脈系多不與同名動脈拌行,所收集的靜脈血先進入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈,;各級靜脈都沒有瓣膜,。它包括腦的動脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng),。腦動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,,細胞形態(tài)大小不一,,呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,,核卵圓形、居中,;2周后細胞匯合,,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,,有分枝狀突起,,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏,;細胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。
英文名稱 | Rabbit Brain Artery Vascular Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 腦動脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8396 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔腦動脈血管平滑肌細胞
組織來源:腦動脈
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔腦動脈血管平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔腦動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腦動脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
SK-BR-3人腺癌細胞 SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 |
酸化谷受體1抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 |
腫瘤血管內(nèi)皮標志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體 | 酸化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 |
豬藍耳病GP5蛋白抗體 | 酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 |
酸化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 |
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 | 小鼠淋巴細胞白血病;L1210 |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1 蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL | U251人膠質(zhì)瘤細胞 Human |
CL-0409P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2 | 草魚肝臟細胞;L8824 |
MDA-MB-231 人癌細胞 | CL-0148MADB106(大鼠癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
CV-1(M)細胞,,非洲綠猴腎細胞 人正常前列腺上皮細胞,RWPE-1細胞 人臍靜脈內(nèi)皮細胞;HUV-EC-C | 兔腦動脈血管平滑肌原代細胞酸化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 |
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B | 人結(jié)直腸腺癌細胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠真皮成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL |
小鼠黑質(zhì)細胞(MN-sn)(1×106) T24, 人膀胱癌細胞 Human | IL25 Protein Rat 重組大鼠 Ierleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標簽) |
大鼠腦成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL | 酸化真核啟動因子2α抗體 |
豬藍耳病GP5蛋白抗體 | 人母細胞瘤細胞;BE(2)-M17 |
酸化谷受體1抗體 | 腫瘤血管內(nèi)皮標志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體 |
酸化真核啟動因子2α抗體 | MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 |