詳細(xì)介紹
兔腦動(dòng)脈血管平滑肌原代細(xì)胞
兔腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞分離自腦動(dòng)脈組織,;腦動(dòng)脈有成對的頸內(nèi)動(dòng)脈和椎動(dòng)脈互相銜接成動(dòng)脈循環(huán);靜脈系多不與同名動(dòng)脈拌行,,所收集的靜脈血先進(jìn)入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈,;各級靜脈都沒有瓣膜。它包括腦的動(dòng)脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng),。腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,,呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,,核卵圓形,、居中,;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏,;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀,;密度高時(shí),,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。
英文名稱 | Rabbit Brain Artery Vascular Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 腦動(dòng)脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8396 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞
組織來源:腦動(dòng)脈
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腦動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腦動(dòng)脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
SK-BR-3人腺癌細(xì)胞 SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 |
酸化谷受體1抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 |
腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體 | 酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 |
豬藍(lán)耳病GP5蛋白抗體 | 酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 |
酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子Tbx5抗體 |
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 | 小鼠淋巴細(xì)胞白血病;L1210 |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1 蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL | U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Human |
CL-0409P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 草魚肝臟細(xì)胞;L8824 |
MDA-MB-231 人癌細(xì)胞 | CL-0148MADB106(大鼠癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
CV-1(M)細(xì)胞,,非洲綠猴腎細(xì)胞 人正常前列腺上皮細(xì)胞,RWPE-1細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C | 兔腦動(dòng)脈血管平滑肌原代細(xì)胞酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激酶A3+A4+A5抗體 |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
小鼠黑質(zhì)細(xì)胞(MN-sn)(1×106) T24, 人膀胱癌細(xì)胞 Human | IL25 Protein Rat 重組大鼠 Ierleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
大鼠腦成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 酸化真核啟動(dòng)因子2α抗體 |
豬藍(lán)耳病GP5蛋白抗體 | 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BE(2)-M17 |
酸化谷受體1抗體 | 腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體 |
酸化真核啟動(dòng)因子2α抗體 | MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 |