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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔腦動脈血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腦動脈血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔腦動脈血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腦動脈 |
英文名稱 | Rabbit Brain Artery Vascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7866 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦動脈組織,；腦動脈有成對的頸內(nèi)動脈和椎動脈互相銜接成動脈循環(huán)；靜脈系多不與同名動脈拌行,，所收集的靜脈血先進(jìn)入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈,；各級靜脈都沒有瓣膜，它包括腦的動脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng),。腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡,；②合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì),；③維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%
兔腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
小鼠紅白血病細(xì)胞;MEL | FRMD7蛋白抗體 |
鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2抗體 | ?；?span>A脫氫酶很長鏈抗體 |
抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 | 腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體 |
微絲相關(guān)蛋白1抗體 | FRMD7蛋白抗體 |
腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體 | ?；?span>A脫氫酶很長鏈抗體 |
IGSF11 Others Human 人 IGSF11 / BTIGSF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TSCCa(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞;P815 |
人肝臟星形細(xì)胞裂解物HHSteCL | Spike Others SARS SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL18RAP Others Human 人 IL18RAP / IL1R7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TSPAN7 Others Mouse 小鼠 TALLA-1 / TSPAN7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (HCMEC)( 5×105 ) SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞 其它 | SELL Others Cynomolgus 食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908 | 兔腦動脈血管內(nèi)皮原代細(xì)胞腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體 |
IL6ST Others Mouse 小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | EAC 小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞 |
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2) | 人海馬趾細(xì)胞(HN-h)(1×106) 人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪 HGC-27人胃癌細(xì)胞 |
Super Tube狗腎細(xì)胞 Super Tube canine kidney cells D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | 回腸脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 |
微絲相關(guān)蛋白1抗體 | 人毛發(fā)干細(xì)胞(HHDPC)( 5×105 ) |
鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2抗體 | 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 |
回腸脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 | IGSF11 Others Human 人 IGSF11 / BTIGSF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
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