兔毛囊干原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代牙乳頭細胞 小鼠肥大細胞癌細胞 英文名稱： P815 人成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒 人成纖維細胞培養(yǎng) 大鼠小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基 100mL 癌組織細胞 大鼠原代肌源性干細胞

兔毛囊干原代細胞

兔毛囊干細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮,。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭,，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織,。毛囊干細胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細胞,。毛囊干細胞屬于成體干細胞，在體內(nèi)處于靜止狀態(tài),，在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力,。研究發(fā)現(xiàn)，毛囊干細胞具有多向分化潛能,，它可以分化成表皮,、毛囊、皮脂腺,，參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程,。毛囊干細胞和其它成體干細胞一樣，具有慢周期性,、未分化性,、自我更新和體外增殖能力強等特點。毛囊干細胞分化經(jīng)毛囊干細胞（hair follicle stem cells,，FSC）,、短暫增殖細胞（transit amplifying cells，TAC）有絲分裂后分化細胞（postmitotic differentiating cells,，PDC）三個階段,。毛囊干細胞在光鏡下呈立方形，細胞體積小,，核漿比率大,，表面光滑，皺褶少,，又被稱為非鋸齒形細胞,，細胞體積的增大與增殖能力呈負相關(guān),。超微結(jié)構(gòu)顯示細胞表面有少許微絨毛，細胞核存在許多卷曲,，染色質(zhì)彌散分布,，這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細胞的特性。

產(chǎn)品名稱：兔毛囊干細胞

組織來源：毛囊

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、EGF,、bFGF,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔毛囊干細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的兔毛囊干采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔毛囊干經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。