兔卵泡膜原代細胞公司出售的產品：小鼠原代心臟纖維原細胞 大鼠上腺嗜鉻細胞瘤細胞（高分化） 英文名稱： PC-12（高分化） 人胚胎絨毛膜細胞培養(yǎng)試劑盒 人胚胎絨毛膜細胞培養(yǎng) 大鼠元細胞培養(yǎng)基 100mL 癌組織細胞 大鼠原代角膜內皮細胞

兔卵泡膜原代細胞

兔卵泡膜細胞分離自卵巢組織,；卵巢是雌性動物的生殖器官,，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同,，僅左側發(fā)育（右側已退化）,，呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡,，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關,。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢,，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能,。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官,，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織,。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質,。皮質位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央,，由疏松結締組織構成,，其中有許多血管、淋巴管和,。哺乳動物的卵巢內卵泡的發(fā)育需要相關激素的調節(jié)才能完成,，垂體（卵泡刺激素和黃體生成素）使原始卵泡開始發(fā)育，其過程中還產生大量的雌激素,。雌激素是卵巢的顆粒細胞和卵泡膜細胞在垂體的作用下協(xié)同合成的,，卵泡膜細胞合成的雄激素透過基膜進入顆粒細胞，并轉變?yōu)榇萍に?。因此,，卵泡膜細胞在生殖內分泌調節(jié)中占有關鍵的位置，了解其在病理及生理中的作用,，對于與性激素有關的婦產科疾?。ㄈ缍嗄衣殉簿C合癥、卵巢癌等）的研究有著重要意義,。在哺乳動物卵泡生長發(fā)育的過程中,，卵母細胞由不斷增加的顆粒細胞層包裹。卵巢組織中的膜細胞作為卵泡的外層細胞可以維持卵泡結構的完整性,，參與構成卵母細胞和顆粒細胞發(fā)育的微環(huán)境且為類固醇激素的生成提供底物,。在哺乳動物中調節(jié)膜細胞類固醇激素生成的機制已見相關報道，但是有關卵泡膜細胞的聚集,、生長和分化的研究尚不深入,。

產品名稱：兔卵泡膜細胞

組織來源：卵巢

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔卵泡膜細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的兔卵泡膜采用膠原酶消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔卵泡膜經3β-HSD免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。