兔卵巢微血管內皮原代細胞公司出售的產品：小鼠原代小腸Cajal間質細胞 小鼠畸胎瘤細胞 英文名稱： P19 人輸尿管上皮細胞培養(yǎng)試劑盒 人輸尿管上皮細胞培養(yǎng) 大鼠腦動脈血管平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL 肺癌組織細胞 大鼠原代晶狀體上皮細胞

兔卵巢微血管內皮原代細胞

兔卵巢微血管內皮細胞分離自卵巢組織,；卵巢是雌性動物的生殖器官,，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同,，僅左側發(fā)育（右側已退化）,，呈葡萄狀,，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產卵期有關,。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構,，而所有鳥類只有左側卵巢有機能,。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織,，其下方有薄層的結締組織,。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結締組織構成,；髓質位于中央，由疏松結締組織構成,，其中有許多血管,、淋巴管和。微血管又稱毛細血管,。分布于各種組織和細胞間的微細的血管,。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,，數量極多,，成網狀分布。管壁由一層內皮細胞及一薄層基膜組成,，厚約0.5微米,。基膜外面有薄層結締組織,，其中有纖維細胞,、巨噬細胞和周細胞等。細的微血管由一個內皮細胞圍成管腔,，較粗的微血管由2-3個內皮細胞圍成,。分布于肌肉組織、組織和結締組織中的微血管,，內皮細胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃）,，稱連續(xù)微血管。血管內皮細胞在器官和組織的結構和功能上起著非常重要的作用,。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關,。近年來血管內皮細胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視,。研究發(fā)現,，不同來源的內皮細胞在生物學特征,、結構和功能等方面均存在一定差別，而同是微血管內皮細胞,，它們又存在器官和組織的特異性。

產品名稱：兔卵巢微血管內皮細胞

組織來源：卵巢

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔卵巢微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的兔卵巢微血管內皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法,、后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測

實驗室分離的兔卵巢微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

 

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數板計數,。