兔卵巢微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞 小鼠畸胎瘤細(xì)胞 英文名稱： P19 人輸尿管上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人輸尿管上皮細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 肺癌組織細(xì)胞 大鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞

兔卵巢微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

兔卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化）,，呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡,，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān),。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢,，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能,。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官,，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織,。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì),。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成,；髓質(zhì)位于中央,，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管,、淋巴管和,。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管,。介于微動脈和微靜脈之間,。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多,，成網(wǎng)狀分布,。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米,?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等,。細(xì)的微血管由一個內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的微血管由2-3個內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織,、組織和結(jié)締組織中的微血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃）,，稱連續(xù)微血管,。血管內(nèi)皮細(xì)胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān),。近年來血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥,、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),，不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞在生物學(xué)特征,、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別，而同是微血管內(nèi)皮細(xì)胞,，它們又存在器官和組織的特異性,。

產(chǎn)品名稱：兔卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：卵巢

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的兔卵巢微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔卵巢微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

 

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。