兔淋巴血管內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞) MLA144長臂猿淋巴瘤細(xì)胞 英文名稱： MLA144 人動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 肺大靜脈平滑肌細(xì)胞 大鼠原代脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

兔淋巴血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

兔淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自淋巴血管組織；淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成,。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似,，但管徑較細(xì)，管壁較薄,，瓣膜較多且發(fā)達(dá),，外形呈串珠狀。淋巴管根據(jù)其位置分為淺,、深二種,。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行,，收集皮膚和皮下組織的淋巴,。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴,。淺,、深淋巴管之間有廣泛的交通支,。淋巴管在向心行程中，通常經(jīng)過一個或多個淋巴結(jié),，從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液,。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。當(dāng)局部感染時,，細(xì)菌,、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大,。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們,，則病變可沿淋巴管的流注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮,，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu),，參與維持體液平衡，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)和機(jī)體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運(yùn)輸,，在疾病過程中也起著重要作用,。近年研究表明，LEC還在傷口愈合,、淋巴管水腫和炎癥擴(kuò)散等病理過程中起重要作用,，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液,、蛋白和組織壓力平衡,；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤,；②淋巴管炎,；③淋巴結(jié)核。

產(chǎn)品名稱：兔淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：淋巴管

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。