詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔結(jié)腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔結(jié)腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔結(jié)腸平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 結(jié)腸 |
英文名稱 | Rabbit Colonic Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X8208 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
兔結(jié)腸平滑肌細(xì)胞分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,,在第3骶椎平面連接直腸,。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,,大部分固定于腹后壁,,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi),。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層,、固有層,、黏膜肌層),,黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜),。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形,、外縱行平滑肌,;結(jié)腸運動少而緩慢,,對刺激的反應(yīng)也較遲緩。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運動和物質(zhì)分泌,、誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等研究中起著重要的作用。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細(xì)胞貼壁伸展,,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,核卵圓形,、居中,;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏,;細(xì)胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀,;密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。結(jié)腸平滑肌運動活性受到遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學(xué)研究的進(jìn)展,,對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細(xì)胞,、分子水平,,要求在胃腸道單個平滑肌細(xì)胞標(biāo)本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學(xué)等實驗,。體外培養(yǎng)細(xì)胞,,由于影響因素單一,是研究細(xì)胞功能以及相應(yīng)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的基礎(chǔ),。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
兔結(jié)腸平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán),。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
小鼠淋巴瘤細(xì)胞;EL4 | 上皮分泌型FAM3C蛋白抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體100抗體 | 過氧化物酶?;?span>A氧化酶2抗體 |
淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體 | 補體因子H抗體 |
α1微球蛋白抗體 | 上皮分泌型FAM3C蛋白抗體 |
補體因子H抗體 | 過氧化物酶酰基A氧化酶2抗體 |
TFRC Others Mouse 小鼠 TFRC / CD71 / ansferrin Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Promocell C-22010 Endothelial Cell Growth Medium, 內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml |
人骨骼肌細(xì)胞裂解物HSkMCL | PRKCD Others Mouse 小鼠 PKC delta / PRKCD 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人胎兒胸腺細(xì)胞株;HFT-8810 [HFT8810] 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | NA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HAEC)( 5×105 ) BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞 Rattus | IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0926 | 兔結(jié)腸平滑肌原代細(xì)胞補體因子H抗體 |
MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / Mer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse |
前脂肪細(xì)胞分化生長添加物PAdDS | 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(HOPC)(貼壁生長) 人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝 AGS人胃腺癌細(xì)胞 |
CCC-HEK-1細(xì)胞,,人胚腎二倍體細(xì)胞 鼠逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細(xì)胞,PT67細(xì)胞 CL-0398NCI-H2452(人間皮瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 |
α1微球蛋白抗體 | CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 (aa 1-208) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
G蛋白偶聯(lián)受體100抗體 | 淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體 |
Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 | TFRC Others Mouse 小鼠 TFRC / CD71 / ansferrin Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |