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兔結(jié)腸成纖維原代細胞
兔結(jié)腸成纖維細胞分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸,。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi),。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層、黏膜肌層）,，黏膜下層（疏松結(jié)締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結(jié)腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結(jié)締組織內(nèi),。成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的結(jié)腸成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質(zhì)透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
英文名稱 | Rabbit Colonic Fibroblast Cells | 組織來源 | 結(jié)腸 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7973 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔結(jié)腸成纖維細胞
組織來源：結(jié)腸
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、bFGF、Insulin,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔結(jié)腸成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔結(jié)腸成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔結(jié)腸成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
小鼠淋巴瘤細胞;P388D1(IL-1) | 凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體101抗體 | ?；D(zhuǎn)移酶1抗體 |
抑癌蛋白AIMP3抗體 | 纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白抗體 |
乳腺癌增強蛋白2抗體 | 凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 |
纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白抗體 | 酰基轉(zhuǎn)移酶1抗體 |
CC Others Human 人 CC / chymoypsin C 人細胞裂解液 (陽性對照) | EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人骨骼肌細胞總RNAHSkMC NA | EDA2R Others Cynomolgus 食蟹猴 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺細胞;HLF-a 人胰腺上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | CD6 Others Mouse 小鼠 CD6 / TP120 人細胞裂解液 (陽性對照) |
RPE Others Human 人 RPE / RPE2-1 人細胞裂解液 (陽性對照) | A2780細胞,，人卵巢癌細胞 鮭魚胚胎細胞,CHSE細胞 腦微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0927 | 兔結(jié)腸成纖維原代細胞纖維細胞生長因子結(jié)合蛋白抗體 |
HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞 小鼠成纖維細胞,，Y2細胞 NK-92MI(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞) | 人結(jié)直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T] |
人前列腺癌細胞;LNCaP | TNFRSF11B Others Cynomolgus 食蟹猴 Osteoprotegerin / TNFRSF11B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
hMNC-CB-c pooledula-pure 臍帶血來源的人類單核細胞 人前列腺微血管內(nèi)皮細胞HPrMEC | Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體 |
乳腺癌增強蛋白2抗體 | CL-0094HCC827(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
G蛋白偶聯(lián)受體101抗體 | 抑癌蛋白AIMP3抗體 |
Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體 | CC Others Human 人 CC / chymoypsin C 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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