兔角膜上皮原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腎動脈平滑肌細胞 狗惡性組織細胞增生癥細胞 英文名稱： DH82 人心肌成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒 人心肌成纖維細胞培養(yǎng) 大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL 輸尿管上皮細胞 大鼠原代臍靜脈內(nèi)皮細胞

兔角膜上皮原代細胞

兔角膜上皮細胞分離自眼角膜組織,；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄,。角膜有十分敏感的末梢,，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛,。為了保持透明,，角膜并沒有血管，透過外界空氣,、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層,、前彈力層,、基質(zhì)層,、后彈力層,、內(nèi)皮細胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織,，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,，分三層細胞層，外層即是上皮細胞,；②角膜上皮細胞能參與先天性免疫,，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細胞能高效表達醛脫氫酶,。角膜上皮細胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學(xué),、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段,，常用于研究細胞代謝產(chǎn)物,、病毒感染、各種生長因子和藥物對細胞生長的影響,。

產(chǎn)品名稱：兔角膜上皮細胞

組織來源：角膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的兔角膜上皮采用混合膠原酶消化結(jié)合上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔角膜上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。