兔甲狀腺濾泡上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代干細(xì)胞 小鼠黑色素瘤細(xì)胞 英文名稱(chēng)： B16 人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 膀胱平滑肌細(xì)胞 大鼠原代少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔甲狀腺濾泡上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔甲狀腺濾泡上皮經(jīng)TG(甲狀腺球蛋白)免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分離自甲狀腺組織；甲狀腺是脊椎動(dòng)物非常重要的腺體,，屬于內(nèi)分泌器官,。在哺乳動(dòng)物身體中，它位于頸部甲狀軟骨下方,，氣管兩旁,。甲狀腺表面有結(jié)締組織被膜，表面結(jié)締組織深入到腺實(shí)質(zhì),，將實(shí)質(zhì)分為許多不明顯的小葉,，小葉內(nèi)有很多甲狀腺濾泡和濾泡旁細(xì)胞。甲狀腺控制使用能量的速度,、制造蛋白質(zhì),、調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)其他賀爾蒙的敏感性。甲狀腺依靠制造甲狀腺素來(lái)調(diào)整這些反應(yīng),，有T3和T4,。這兩者調(diào)控代謝、生長(zhǎng)速率還有調(diào)解其他的身體系統(tǒng),。T3和T4由碘和酪胺酸合成,。甲狀腺也生產(chǎn)降鈣素，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣的平衡,。其中,，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞（也稱(chēng)為濾泡細(xì)胞或主要細(xì)胞）是在甲狀腺細(xì)胞是負(fù)責(zé)生產(chǎn)和分泌甲狀腺激素，甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原（T3）,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。