兔脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代全骨髓細(xì)胞 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 英文名稱： raw264.7 人支氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人支氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 上皮細(xì)胞 大鼠原代腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的兔脊髓少突膠質(zhì)采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法,、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔脊髓少突膠質(zhì)經(jīng)GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

兔脊髓少突膠質(zhì)細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的結(jié)構(gòu),，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護,；是源自腦的中樞系統(tǒng)延伸部分。中樞系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的信息,。人和脊椎動物中樞系統(tǒng)的一部分,，在椎管里面，上端連接延髓,，兩旁發(fā)出成對的,，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個H形（蝴蝶型）灰質(zhì)區(qū),，主要由細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),，主要由有髓纖維組成,；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的（稱為脊）分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官,。脊髓是周圍與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞,。按脊的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),，31對脊就是由不同的脊椎發(fā)出的。膠質(zhì)細(xì)胞,，簡稱膠質(zhì)細(xì)胞,，是組織中除元以外的另一大類細(xì)胞，也有突起,，但無樹突和軸突之分,，廣泛分布于中樞和周圍系統(tǒng)。在哺乳類動物中,，膠質(zhì)細(xì)胞與元的細(xì)胞數(shù)量比例約為10：1,。在中樞系統(tǒng)（CNS）中的膠質(zhì)細(xì)胞主要有星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞（與前者合稱為大膠質(zhì)細(xì)胞）和小膠質(zhì)細(xì)胞等,。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細(xì)胞屬于結(jié)締組織,，其作用僅是連接和支持各種成分,，其實膠質(zhì)還起著分配營養(yǎng)物質(zhì),、參與修復(fù)和吞噬的作用，在形態(tài),、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、PDGF-AA,、bFGF,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：不增殖,；不傳代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔脊髓少突膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。