詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌腱干采用膠原酶、蛋白酶混合消化法并通過(guò)肌腱干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌腱干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔肌腱干原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肌腱組織 |
英文名稱 | Rabbit Tendon Stem Cells | 貨號(hào) | YS-01X7021 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔肌腱干細(xì)胞分離自肌腱組織;肌腱是肌腹兩端的索狀或膜狀致密結(jié)締組織,,便于肌肉附著和固定,。一塊肌肉的肌腱分附在兩塊或兩塊以上的不同骨上,是由于肌腱的牽引作用才能使肌肉的收縮帶動(dòng)不同骨的運(yùn)動(dòng),。每一塊骨骼肌都分成肌腹和肌腱兩部分,,肌腹由肌纖維構(gòu)成,色紅質(zhì)軟,,有收縮能力,,肌腱由致密結(jié)締組織構(gòu)成,色乳白較硬,,沒(méi)有收縮能力,。肌腱把骨骼肌附著于骨骼。長(zhǎng)肌的肌腱多呈圓索狀,,闊肌的肌腱闊而薄,,呈膜狀,又叫腱膜,。此處的肌腹即為通常所說(shuō)的紅肌,,而肌腱即為白肌,分別控制肌肉的力量、爆發(fā)力和耐力,。肌腱干細(xì)胞(TSCs)是一種來(lái)源于肌腱組織的間充質(zhì)干細(xì)胞,,其具有多向分化潛能,并且在外源性前列腺素E2作用下異常分化,。體外培養(yǎng)時(shí)該細(xì)胞群具有克隆形成能力,、自我更新及多向分化潛能等干細(xì)胞的普遍特性。肌腱干細(xì)胞可以被誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞,、軟骨樣細(xì)胞,、骨細(xì)胞分化;在裸鼠模型中,,肌腱干細(xì)胞還可以形成肌腱樣組織,,軟骨樣組織以及腱-骨連接樣組織等。相比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞而言,,TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力,,軟骨相關(guān)基因和肌腱相關(guān)基因表達(dá)更高,具有更好的成骨,、成脂和成軟骨能力,,因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品:
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來(lái)自NIH3T3);PA12 | 酸化酪蛋白激酶3抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體125抗體 | 脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體 |
肺α/β水解酶蛋白3抗體 | 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10抗體 |
酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體 | 酸化酪蛋白激酶3抗體 |
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10抗體 | 脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體 |
LYG1 Others Human 人 Lysozyme G-like 1 / LYG1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | ACVR2A Others Human 人 ACVR2 / ACII / ACVR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人海馬趾細(xì)胞HN-h | LAMP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP3 / DC-LAMP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人羊膜細(xì)胞;HA 人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
ESAM Others Human 人 ESAM 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | TGFBR2 Others Human 人 TGFβR2 / TGFR2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYB | 兔肌腱干原代細(xì)胞成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10抗體 |
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Daudi 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 |
CNE1, 人鼻咽癌細(xì)胞系 Human | HIT-T15細(xì)胞,,倉(cāng)鼠beta胰島細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MCF-7B細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF |
RPS6KA6 Others Human 人 RSK4 / RPS6KA6 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | α-L巖藻糖苷酶抗體 |
酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體 | BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
G蛋白偶聯(lián)受體125抗體 | 肺α/β水解酶蛋白3抗體 |
α-L巖藻糖苷酶抗體 | LYG1 Others Human 人 Lysozyme G-like 1 / LYG1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán),。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。