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兔肌腱成纖維原代細(xì)胞
兔肌腱成纖維細(xì)胞分離自肌腱組織,；肌腱是肌腹兩端的索狀或膜狀致密結(jié)締組織,，便于肌肉附著和固定,。一塊肌肉的肌腱分附在兩塊或兩塊以上的不同骨上,，是由于肌腱的牽引作用才能使肌肉的收縮帶動(dòng)不同骨的運(yùn)動(dòng),。每一塊骨骼肌都分成肌腹和肌腱兩部分，肌腹由肌纖維構(gòu)成，色紅質(zhì)軟,，有收縮能力,，肌腱由致密結(jié)締組織構(gòu)成，色乳白較硬,，沒有收縮能力,。肌腱把骨骼肌附著于骨骼。長肌的肌腱多呈圓索狀,，闊肌的肌腱闊而薄,，呈膜狀，又叫腱膜,。此處的肌腹即為通常所說的紅肌,，而肌腱即為白肌，分別控制肌肉的力量,、爆發(fā)力和耐力,。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,；成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
英文名稱 | Rabbit Tendon Fibroblast Cells | 組織來源 | 肌腱組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7216 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔肌腱成纖維細(xì)胞
組織來源：肌腱組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌腱成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肌腱成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
THP 1細(xì)胞,，單核細(xì)胞型淋巴瘤細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系,PC-3M 2B4細(xì)胞 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF NA | 酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 |
酸化非受體型酪蛋白激酶抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體 |
腫瘤壞死因子受體超家族成員5抗體 | 酸化0脂酰肌醇激酶p85β抗體 |
軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體 | 酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 |
酸化0脂酰肌醇激酶p85β抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體 |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A | 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1 |
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1 小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 Rattus |
MX-1 人癌細(xì)胞 | DKK1 Protein Rhesus 重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 標(biāo)簽) |
A549, 人肺癌細(xì)胞系 | CL-0135L1210(小鼠白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
SW 1353人軟骨肉瘤細(xì)胞 SW 1353 in human chondrosarcoma cells L-15培養(yǎng)基+10%FBS | 兔肌腱成纖維原代細(xì)胞酸化0脂酰肌醇激酶p85β抗體 |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 | LoVo人結(jié)腸癌細(xì)胞 LoVo human colon cancer cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS |
CD180 Others Mouse 小鼠 CD180 / RP105 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4) |
人成纖維細(xì)胞;HFF | 酸化原癌基因CBL2抗體 |
軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體 | 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞裂解物HOPCL |
酸化非受體型酪蛋白激酶抗體 | 腫瘤壞死因子受體超家族成員5抗體 |
酸化原癌基因CBL2抗體 | 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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