兔滑膜原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代臍靜脈平滑肌細胞 小鼠骨髓瘤淋巴細胞 英文名稱： N-H 人呼吸道上皮細胞培養(yǎng)試劑盒 人呼吸道上皮細胞培養(yǎng) 大鼠動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL 外根鞘細胞 大鼠原代視網(wǎng)膜色素上皮細胞

兔滑膜原代細胞

兔滑膜細胞分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結構,，各種關節(jié)內(nèi)疾病均會累及滑膜。而滑膜細胞是維持關節(jié)正常功能的重要組織結構,，同時在各種關節(jié)疾患中也是主要病變部位,。骨關節(jié)炎（OA）以關節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P節(jié)的各個組成部分,，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨,、滑膜、半月板和韌帶,。各組成部分的病理改變相互影響,，相互作用,，共同加速關節(jié)的退變?；ぜ毎菢嫵苫拥拇蠹毎后w，是維持關節(jié)正常功能的重要組織結構,，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布,?；び?span>A型（巨噬樣滑膜細胞）,、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成?；ぜ毎饕δ埽孩倩ぜ毎a(chǎn)生潤滑液成分，并且與關節(jié)腔的吸收和血液/潤滑液交換有關,；②滑膜細胞增生，表現(xiàn)為不依賴于支持物生長,，并且分泌大量的效應分子來促進炎癥和關節(jié)損壞；③是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡中效應因子的一部分,。

產(chǎn)品名稱：兔滑膜細胞

組織來源：滑膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的兔滑膜采用混合酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔滑膜經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。