詳細(xì)介紹
兔虹膜色素上皮原代細(xì)胞
兔虹膜色素上皮細(xì)胞分離自眼球虹膜組織;虹膜是眼睛構(gòu)造的一部分,屬于眼球中層,位于血管膜的前部,;在睫狀體前方虹膜,中心有一圓形開口,,稱為瞳孔,,猶如相機當(dāng)中可調(diào)整大小的光圈,內(nèi)含色素決定眼睛的顏色,。日間光線較為強烈時,,虹膜會收蹜,只使一小束光線穿透瞳孔,,進入眼睛,;當(dāng)進入黑暗環(huán)境中,虹膜就會往后退縮,,使瞳孔變大,,讓更多的光線進入眼睛,多數(shù)的脊椎動物的眼睛都有虹膜,。虹膜色素上皮細(xì)胞(IPE)是虹膜重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一,,位于虹膜組織的后面,和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)同樣起源于外胚葉層,,可能具有相似的生物學(xué)功能,,因此對IPE的研究將為防治因RPE結(jié)構(gòu)或功能異常而導(dǎo)致的眼底病提供新思路。
英文名稱 | Rabbit Iris Pigment Epithelial Cells | 組織來源 | 眼球 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8366 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔虹膜色素上皮細(xì)胞
組織來源:眼球
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔虹膜色素上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔虹膜色素上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔虹膜色素上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T6-Swiss albino | Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) 0酸化酪羥化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
MAO(Human monoamine oxidase) ELISA Kit 人單胺氧化酶 96T | Anti-Mouse IgA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗小鼠IgA抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh THOC2 轉(zhuǎn)錄因子THOC2抗體 規(guī)格 0.2ml | Alpha2-MG(Human Alpha2 macroglobulin) ELISA Kit 人α2巨球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
HABP2: 透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體 規(guī)格 0.1ml |
phospho-Fos B (Ser27): 0酸化癌基因FOS蛋白B抗體 0.1ml | E3 ELISA Kit 大鼠雌三醇Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
AZGP1 Others Human 人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg | 小鼠中腦縫細(xì)胞(腦脊)(MN-r)(1×106) |
EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 二:大鼠正常細(xì)胞 |
FUT10 Others Human 人 FUT10 / Fucosylansferase 10 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12未分化(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao | 兔虹膜色素上皮原代細(xì)胞Alpha2-MG(Human Alpha2 macroglobulin) ELISA Kit 人α2巨球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
IL1RAPL2 Others Human 人 IL1R9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-R014大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
中國倉鼠肺細(xì)胞;CHL | SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4](慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4] (leiviral consuct stable sain) of human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin |
INSL4 Others Human 人 INSL4 / EPIL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-RAR- Beta /FITC 熒光素標(biāo)記維受體-β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
OSTM1: 骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1抗體 0.2ml | CR2 Others Human 人 CD21 / CR2 / C3DR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Somatostatin Receptor 1: 受體1抗體 0.1ml | phospho-CDKN2A (Ser140): 0酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Donkey anti-GIgG whole serum 驢抗豚鼠IgG抗血清 規(guī)格 1ml | AZGP1 Others Human 人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |