詳細介紹
兔海綿體平滑肌原代細胞
兔海綿體平滑肌細胞分離自海綿體組織,;海綿體,又稱海綿體肌,,是硬的平滑肌和結(jié)締組織,。海綿體是一種勃起組織,外面包有堅厚的白膜,,內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架,,其腔隙與血管相通。它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞,、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分,。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質(zhì)的膠原中,在消化海綿體組織時,,膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系,,破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細胞,。平滑肌,,是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁,、膀胱,、子宮、男性和女性生殖道,、消化道,、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜,。平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,,呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,,核卵圓形,、居中;2周后細胞匯合,,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,有分枝狀突起,,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏;細胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀,;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。
英文名稱 | Rabbit Corpora Cavernous Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 海綿體 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7954 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔海綿體平滑肌細胞
組織來源:海綿體
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔海綿體平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔海綿體平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔海綿體平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 人胰腺癌細胞,NCL-H548細胞 MDCK (NBL-2)(狗腎細胞) | Rhesus antibody Rh GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 規(guī)格 0.2ml |
I CTP(Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 2ml |
IL-9: 白介素9抗體 0.1ml | Human anti-IgA antibody ELISA Kit 人抗IgA抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RENBP 腎素結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Leptin receptor(long)/FITC 熒光素標(biāo)記瘦素受體抗體(長)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-STAT6(Tyr641) 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格 0.1ml | sMHC-1(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1 96T |
人惡性黑色素瘤細胞;A-375 [A375] | CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
人細胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL | 4T1 小鼠癌細胞 |
小腸隱窩上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細胞 | 人氣管上皮細胞裂解物HTEpiCL |
MEG-01細胞,,人成巨核細胞白血病細胞 正常小鼠Leydig細胞,TM3細胞 間充質(zhì)干細胞生長添加物MSCGS | 兔海綿體平滑肌原代細胞Human anti-IgA antibody ELISA Kit 人抗IgA抗體 96T |
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | ADAM12 Others Human 人 ADAM12 人細胞裂解液 (陽性對照) |
FGFR2 Others Mouse 小鼠 FGFR2 / CD332 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H105人皮下脂肪細胞培養(yǎng)基100mL |
體細胞;HEL | Rhesus antibody Rh APAF1(NT) 凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端) 規(guī)格 0.1ml |
BDP: 母細胞瘤相關(guān)蛋白ARID3B抗體 0.2ml | MHCC97-H 高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞 |
Anti-VEGF-A/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | PRSS3: 腦酶3抗體 0.2ml |
Anti-CDK8/FITC 熒光素標(biāo)記周期素依賴性激酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | 人惡性黑色素瘤細胞;A-375 [A375] |
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。