詳細介紹
兔海綿體內(nèi)皮原代細胞
兔海綿體內(nèi)皮細胞分離自海綿體組織,;陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構成的血竇結構,,它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞,、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分,。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質的膠原中,,而海綿體內(nèi)皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面,,僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時,,膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系,,破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大,,平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來,,從而影響海綿體內(nèi)皮細胞的純度。因此,,比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內(nèi)皮細胞的關鍵,。
英文名稱 | Rabbit Cavernous Endothelial Cells | 組織來源 | 海綿體 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8364 |
細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔海綿體內(nèi)皮細胞
組織來源:海綿體
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):內(nèi)皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔海綿體內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔海綿體內(nèi)皮采用混合酶消化法結合機械分離法、并用內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的兔海綿體內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3 | Lptn/LTN/XCL1 ELISA Kit 大鼠淋巴細胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
C5orf55: 5號染色體開放閱讀框55抗體 0.2ml | Glutathione Synthetase: 合成酶抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CDKN3 細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Presenilin 1 + 2: 早老素蛋白1+2抗體 0.1ml |
Anti-Phospho-NMDAR2A (Tyr1246) /FITC 熒光素標記0酸化谷受體2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | ets1/E26 (E-twenty six 1) Ets轉錄因子家族ets1抗原 0.5mg |
IgG/Gold 金標記兔抗豚鼠IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml | MCP1: 單核細胞趨化蛋白1抗體 0.1ml |
MAPK14 Others Human 人 p38 alpha / MAPK14 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人橫紋肌肉瘤細胞;A-204 | 4. 淋巴細胞系統(tǒng) |
SERPINF2 Others Human 人 SerpinF2 / SERPINF2 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD40LG Others Rat 大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) |
OS-RC-2(人腎癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細胞裂解液 (陽性對照) | Sw626細胞,人卵巢癌細胞 鮭魚胚胎細胞,RTG細胞 破骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8 | 兔海綿體內(nèi)皮原代細胞Presenilin 1 + 2: 早老素蛋白1+2抗體 0.1ml |
NCI-N87 [N87]人胃癌細胞 NCI-N87 human gasic cancer cells [N87] RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 人結直腸腺癌細胞;HCT-8 [HRT-18] |
人母細胞瘤細胞;SH-SY5Y | IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-17E/IL-25/FITC 熒光素標記白介素-17E抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Anti-SAP-1/Synaptophysin 突觸相關蛋白-1/突觸素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml | CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
Rhesus antibody Rh Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr869/873/876) 0酸化促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KIF15 驅動蛋白家族成員15抗體 規(guī)格 0.2ml |
BRAK/CXCL14(Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK) ELISA Kit 人胸腎表達趨化因子 96T | MAPK14 Others Human 人 p38 alpha / MAPK14 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |