兔海馬神經(jīng)元原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腦膜細(xì)胞 小鼠肝癌細(xì)胞 英文名稱： Hepa 1-6 人胃癌組織源成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 人胃癌組織源成纖維細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠顆粒細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 真皮成纖維細(xì)胞 大鼠原代下丘腦元細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬元采用消化法、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

兔海馬元細(xì)胞分離自海馬體,；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回,、海馬區(qū),、大腦海馬，海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí),。海馬元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成,，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié),、是老年性癡呆,、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng),，在學(xué)習(xí),、記憶、情緒反應(yīng)及系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用,，而且海馬組織是中樞系統(tǒng)內(nèi)主要的干細(xì)胞聚集區(qū),，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和元相對獨(dú)立分布的特點(diǎn),，境界相對清晰,，便于取材，因此,，海馬元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。海馬元細(xì)胞培養(yǎng)是研究細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細(xì)胞因子)的有效細(xì)胞模型,，其在生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.125%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔海馬元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：