兔海馬神經(jīng)元原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腦膜細胞 小鼠肝癌細胞 英文名稱： Hepa 1-6 人胃癌組織源成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒 人胃癌組織源成纖維細胞培養(yǎng) 大鼠顆粒細胞培養(yǎng)基 100mL 真皮成纖維細胞 大鼠原代下丘腦元細胞

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細胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的兔海馬元采用消化法,、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔海馬元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

 

細胞簡介：

兔海馬元細胞分離自海馬體；海馬體(Hippocampus),，又名海馬回,、海馬區(qū)、大腦海馬,，海馬體主要負責記憶和學習,。海馬元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成，主要功能是參與近期記憶,、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié),、是老年性癡呆,、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng),，在學習,、記憶、情緒反應及系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用,，而且海馬組織是中樞系統(tǒng)內(nèi)主要的干細胞聚集區(qū),，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和元相對獨立分布的特點，境界相對清晰,，便于取材,，因此，海馬元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究者當做理想的實驗模型,。海馬元細胞培養(yǎng)是研究細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,，其在生物學，發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：元細胞樣

傳代特性：屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.125%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔海馬元細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：