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詳細(xì)介紹
兔冠狀動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
兔冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈,，起于主動脈根部,，分左右兩支,，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則,，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型,、均衡型、左優(yōu)勢型,。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支,。左冠狀動脈為一短干，發(fā)自左主動脈竇,，經(jīng)肺動脈起始部和左心耳之間,，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支,。前室間支沿前室間溝下行,，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層扁平分布,，是一薄層的專門上皮細(xì)胞,，它形成冠狀動脈的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口,。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng),，由心臟直至小的微血管。
英文名稱 | Rabbit Coronary Artery Endothelial Cells | 組織來源 | 冠狀動脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7768 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：冠狀動脈
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔冠狀動脈內(nèi)皮采用混合酶短暫消化后組織貼塊,、結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔冠狀動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
RN-h, 大鼠海馬趾元 正常人細(xì)胞，Hs 1.Tes細(xì)胞 MDBK (NBL-1)(牛腎細(xì)胞) | NAIP(Human neuronal apoptosis inhibitory protein) ELISA Kit 人元凋亡抑制蛋白 96T |
Rarres3： 酸受體應(yīng)答蛋白3抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh PTOV1 前列腺高表達(dá)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HERG/FITC 熒光素標(biāo)記特異性離子通道蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C7orf72： 7號染色體開放閱讀框72抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BOLA2 BOLA2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CXCR3/CD183(rat,mo) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗大,、小鼠細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體 Anti-FGFR3 0.1ml | phospho-Akt(Thr308)： 0酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205 | 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 |
雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6 小鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | HAVSMC, 人主動脈平滑肌細(xì)胞 Human |
人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | ANGPTL2 Protein Mouse 重組小鼠 ANGPTL2 / Angiopoietin-like 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
HGC-27人胃癌細(xì)胞 | CL-0130K-562(人慢性骨髓性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
A375細(xì)胞,，人惡性黑色素瘤細(xì)胞 糞腸球菌 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480] | 兔冠狀動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞C7orf72： 7號染色體開放閱讀框72抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E1 | HGC-27細(xì)胞，人未分化胃癌細(xì)胞 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)-M17細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-1 |
MANF Others Human 人 MANF / ARMET 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | LA795(小鼠肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人胚胎膀胱組織來源細(xì)胞;CCC-HB-2 | Kappa light chain/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GREB1 癌雌激素調(diào)控蛋白GREB1抗體 規(guī)格 0.1ml | 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA |
phospho-MEK1 (Ser385)： 0酸化原活化蛋白激酶1抗體 0.1ml | Anti-M2-PK (pyruvate Kinase M2) 酸激酶-M2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
histon-H2b(Mouse histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2bMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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