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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨采用膠原酶聯(lián)合蛋白酶消化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔關(guān)節(jié)軟骨原代細(xì)胞 | 組織來源 | 關(guān)節(jié)軟骨組織 |
英文名稱 | Rabbit Articular Chondrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7003 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)軟骨組織；關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨,，表面光滑,、呈淡藍(lán)色、有光澤,，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架,，這種框架呈半環(huán)形,，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上,，上端朝向關(guān)節(jié)面,，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會(huì)掉下來，同時(shí)當(dāng)受到壓力時(shí)候,，還可以有少許的變形,，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間,，散在分布著軟骨細(xì)胞,，軟骨細(xì)胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細(xì)胞組成，這些軟骨細(xì)胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝,。關(guān)節(jié)軟骨沒有支配,，也沒有血管，其營養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得,，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中,，關(guān)節(jié)軟骨的這種營養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行,，所以關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)對于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用,。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層,，單個(gè)分布,、體積較小、呈橢圓形,，長軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行,，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形,、染色淺,，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi),，這些關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下,，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中,，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
HFTF細(xì)胞,，人胚胎眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞 遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L2 | Rhesus antibody Rh GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 規(guī)格 0.2ml |
P I NP(Human procollagen I N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前膠原N端前肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml |
ILVBL： 乙酰乳酸合成酶蛋白抗體 0.2ml | PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
Rhesus antibody Rh Renin 腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-Leptin receptor(long) /FITC 熒光素標(biāo)記瘦素受體抗體(長)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 0酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml | MHC I /RLA I (Rabbit major histocompatibility complex I ) ELISA Kit 兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類 96T |
CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 | 大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清 | EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17 | 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 |
人小腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人肺泡上皮細(xì)胞裂解物HPAEpiCL |
ECV304細(xì)胞，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H345細(xì)胞 CL-0403NCI-H524(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 兔關(guān)節(jié)軟骨原代細(xì)胞PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
HGC-27 人胃癌細(xì)胞(未分化) | CA10 Others Human 人 CA10 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H103胎兒真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人羊膜細(xì)胞;WISH | Rhesus antibody Rh APBA3/Mint3/X11gamma β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml |
beta IV Tubulin： 微管蛋白β4抗體 0.2ml | KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤瘤株;LⅡ |
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PTK9： 蛋白酪酸激酶9抗體 0.2ml |
Anti-CDK7/Cyclin H/MAT1 /FITC 熒光素標(biāo)記周期素依賴性激酶7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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