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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨髓單個(gè)核采用取骨髓,、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨髓單個(gè)核經(jīng)過檢測(cè),，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔骨髓單個(gè)核原代細(xì)胞 | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Rabbit Bone Marrow Mononuclear Cells | 貨號(hào) | YS-01X8355 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離自骨髓,；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨,、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓單個(gè)核細(xì)胞是骨髓中具有單個(gè)核的細(xì)胞,，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。注意這里是（mononuclear cell）單個(gè)核細(xì)胞,，而不是（Monocyte）單核細(xì)胞,。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與骨髓其他細(xì)胞不同,，利用一定比例聚蔗糖和鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心,，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，可將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不增殖,；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔骨髓單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小鼠皮質(zhì)元MN-c | Nogo-A： 軸索過度生長(zhǎng)抑制因子-A抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Matriptase 2 膜型絲蛋白酶2抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSLP/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞生成素-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mg | Anti-P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Brs3/Bombesin Receptor 3/FITC 熒光素標(biāo)記蛙皮素受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLAMF7/CD319 SLAMF7抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化原活化蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ATH III /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
KEAP1 Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CDH12 Others Human 人 CDH12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人滑膜細(xì)胞HS | EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HHpC-c 人肝細(xì)胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC | CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 胎盤羊膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IgG Others Rabbit 兔 IgG-Fc (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來源) | 兔骨髓單個(gè)核原代細(xì)胞Anti-P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 383-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | P815 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞 |
前列腺平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | LEPR Others Human 人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
NCI-N87細(xì)胞,，人胃癌細(xì)胞 人淋巴細(xì)胞與倉鼠肺細(xì)胞雜交細(xì)胞,FD6細(xì)胞 CL-0387MS751(人子宮頸表皮癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | GIMAP3： GTP酶IMAP家族成員3抗體 0.2ml |
Human Tissue factor,IF ELISA Kit 人組織因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | PCNA Others Human 人 PCNA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
營養(yǎng)因子-3抗體 Anti-NT-3 0.1ml | F-TESTO ELISA Kit 大鼠游離睪酮 96T |
Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)： 0酸化Ack1抗體 0.1ml | KEAP1 Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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