化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
兔骨骼肌成纖維原代細(xì)胞
兔骨骼肌細(xì)胞分離自四肢肌肉組織,；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種，約占全身重量的40%,。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附,。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢,。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,，有豐富的血管,、淋巴分布，在軀體支配下收縮或舒張,，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng),。肌肉可根據(jù)共形狀、大小,、位置,、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名,。依形態(tài)命名的如斜方肌,、菱形肌,、三角肌,、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,，不分支,，有明顯橫紋，核很多,，且都位于細(xì)胞膜下方,。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）,。明帶染色較淺,，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線,。H線的中部有一M線,。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線,。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞,，細(xì)胞呈纖維狀,，不分支，有明顯橫紋,，核很多,，且都位于細(xì)胞膜下方,，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性,。
英文名稱 | Rabbit Skeletal Muscle Fibroblast Cells | 組織來(lái)源 | 骨骼肌 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7949 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔骨骼肌成纖維細(xì)胞
組織來(lái)源：骨骼肌
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔骨骼肌成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的tu骨骼肌成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
人惡性黑色素瘤細(xì)胞;A-375 [A375] 大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CXCR3 ELISA Kit 大鼠CXC趨化因子受體3 96T |
Rab27a： RAM-11抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PTPH1/PTPN3 蛋白酪0酸酶H1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho-HER2 (Tyr877)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化HER2受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CCDC43： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白43抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Bone Sialoprotein/BSP 骨涎蛋白 規(guī)格 0.1ml | Anti-CXC-R1 /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體抗體 Anti-KGFR 0.2ml | AP1M2： AP-1μ2抗體 0.1ml |
M1 小鼠白血病細(xì)胞 | CM-R002大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
NCI-N87細(xì)胞,，人胃腺癌細(xì)胞 人跟骨髓瘤細(xì)胞,Hp2/o細(xì)胞 草魚(yú)腎細(xì)胞;GIK | DH82(犬巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠腦膜細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
SK-N-SH, 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | CL-0124IMR-32(人母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
MCF 10A人正常上皮細(xì)胞 MCF 10A of normal human mammary epithelial cells MEGM Bullet Kit(Clonetics Corparation CC-3150)+100ng/ml choleratoxin(Sigma C8052) | 兔骨骼肌成纖維原代細(xì)胞CCDC43： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白43抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO-76 | P815細(xì)胞,，小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞 V79-4(中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-C;Vero-HCV-C |
HBdMEC-c 人膀胱微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBdMEC) 500,000cells 皮下脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C | IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRIM19 干擾素/維誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體 規(guī)格 0.1ml | 人上皮細(xì)胞HMEpiC |
EMSY： EMSY蛋白抗體 0.2ml | Anti-LYVE-1 淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
TSP-1(Mouse thrombospondin 1) ELISA Kit 小鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | M1 小鼠白血病細(xì)胞 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
化工儀器網(wǎng)