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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腹膜間皮經(jīng)PCK,、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔腹膜間皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腹膜 |
英文名稱 | Rabbit Peritoneal Mesothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8346 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔腹膜間皮細(xì)胞分離自腹膜組織,；腹膜是存在于高等脊椎動(dòng)物腹腔中的一層黏膜，主要由間皮細(xì)胞構(gòu)成,，藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織,。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官，能分泌黏液潤(rùn)濕臟器的表面,，減輕臟器間的摩擦,。腹腔臟器的血液、淋巴和組織經(jīng)由腹膜與外界相連,；腹膜也具有吸收撞擊保護(hù)內(nèi)臟的效果,。腹膜（peritoneum）為全身面積大、配布復(fù)雜的漿膜,，由皮及少量結(jié)締組織構(gòu)成,，薄而光滑,，呈半透明狀。襯于腹,、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層,；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜臟層,。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù),、移行，共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙,，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity）,。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙,。腹膜腔內(nèi)有少量漿液,，在臟器活動(dòng)時(shí)可減少摩擦。腹膜間皮細(xì)胞屬于上皮組織中的單層扁平上皮,，是覆蓋于腹膜表面的一層細(xì)胞,。間皮細(xì)胞是構(gòu)成間皮的細(xì)胞，正常大小約為15-25微米,，細(xì)胞常呈圓形或者卵圓形,。其功用是提供潤(rùn)滑，使器官與器官,、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護(hù),，不會(huì)互相磨損受傷。而間皮所生產(chǎn)的潤(rùn)滑和保護(hù)作用就是靠間皮細(xì)胞所分泌的物質(zhì)來(lái)達(dá)成,，分泌物多半為細(xì)胞外基質(zhì),、玻尿酸類物質(zhì)。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔腹膜間皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
SF767細(xì)胞,，人腦瘤細(xì)胞 陰溝腸桿菌 人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHAEC NA | Rhesus antibody Rh GDIA2/ARHGDIB 轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體 規(guī)格 0.1ml |
AACT(Human Alpha1 Antichymotrypsin) ELISA Kit 人α1抗胰白酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml |
IRX5： Iroquois同源蛋白5抗體 0.2ml | anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit 人抗DNA酶B抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RERG Ras相關(guān)雌激素調(diào)節(jié)生長(zhǎng)抑制蛋白 規(guī)格 0.2ml | Anti-LDL/FITC 熒光素標(biāo)記低密度脂蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-STXBP1(Ser515) 0酸化突觸前膜胞內(nèi)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | AChE ELISA Kit 大鼠乙酰酯酶 96T |
RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2) |
801-D細(xì)胞,，人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞 轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控，含EGFP基因的CHO細(xì)胞,CHO-AA8細(xì)胞 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | Sf-21(昆蟲(chóng)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B | CW-2(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
U-87 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U-87 MG of brain asocytic blastoma DMEM+10% FBS | 人牙周膜成纖維細(xì)胞裂解物HPLFL |
769-P細(xì)胞,，人腎癌細(xì)胞系(769-P) 中國(guó)倉(cāng)鼠倉(cāng)鼠肺細(xì)胞,R1610細(xì)胞 CL-0406NCI-H838(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 兔腹膜間皮原代細(xì)胞anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit 人抗DNA酶B抗體 96T |
眼晶狀體上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | EPHA6 Others Mouse 小鼠 EphA6 / EHK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MAP4K5 Others Human 人 MAP4K5 / MEKKK5 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H093人顱蓋造骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
IFNG Protein Human 重組人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 | Rhesus antibody Rh APC70/CRSP70 轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-BCAR1 (Tyr249)： 0酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 0.1ml | CM-R016大鼠胰腺星狀細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
Anti-TRADD/FITC 熒光素標(biāo)記有死亡區(qū)的壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PHLP： 抑制基因PHLPP抗體 0.2ml |
Anti-CDK2/FITC 熒光素標(biāo)記周期素依賴性激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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