詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔附睪上皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔附睪上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔附睪上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | |
英文名稱 | Rabbit Epididymal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8345 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
兔附睪上皮細(xì)胞分離自附睪組織,;附睪(Epididymis)是一個由曲折,、細(xì)小的管子構(gòu)成的器官,一端接著輸精管(Ductusdeferens),,一端接著睪丸(Testis)的曲細(xì)精管,,具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣,,可分為頭,、體、尾三部,。離開睪丸后通過輸出小管進(jìn)入附睪,。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養(yǎng)的功能,以促進(jìn)的進(jìn)一步成熟附睪的功能是暫存,,促進(jìn)的進(jìn)一步成熟,。在附睪內(nèi)獲得運動能力,總共停留8~17天,,終達(dá)到功能上的成熟,。在這個過程中,除了自身的因素,,還受到附睪微環(huán)境的影響,,這包括了一系列的物理,、化學(xué)變化和形態(tài)的改變??梢哉f,,附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件。若附睪的功能發(fā)生異常,,則不能成熟,,引起不育。附睪上皮含有主細(xì)胞,、基細(xì)胞,、亮細(xì)胞等幾種類型細(xì)胞?;?xì)胞,,其頂部離附睪管腔有一定距離,在附睪各部分,,其形態(tài)沒有差別,,一般認(rèn)為是貯備細(xì)胞;另一種主細(xì)胞,,是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ),,在各區(qū)段的主細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大,這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異,。除上皮細(xì)胞外,,附睪的管壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化,附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮,,而尾部平滑肌就沒有這種特點,,僅在射精一瞬間出現(xiàn)強烈的節(jié)律收縮。作為負(fù)責(zé)提供適合成熟微環(huán)境的附睪,,具有活躍的分泌與吸收功能,。其中,附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運,,對保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度,為成熟提供適宜的環(huán)境起著相當(dāng)重要的作用,。睪丸的支持細(xì)胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液,,如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液,而從附睪排出的只不過幾百微升,,也就是說睪丸分泌液有99%被附睪上皮重新吸收回體內(nèi),。動物實驗表明,結(jié)扎輸精管時睪丸不會腫脹,,但若結(jié)扎睪丸輸出小管,,睪丸第二天就會腫脹,,這就充分證實了附睪存在著強有力的吸收功能,但是重新吸收的意義尚不清楚,。體外培養(yǎng)附睪上皮細(xì)胞對的發(fā)育,、成熟,附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義,。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、EGF、Hydrocortisone,、腎上腺素,、甲狀腺素、Insulin,、Transferrin,、Selenium Solution、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔附睪上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品:
小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 | IFI16/p16 ELISA Kit 大鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
C10orf62: 10號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml | phospho-GABRG2(Ser366): 0酸化γ基γ2受體抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CDX2/3 尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體 規(guī)格 0.2ml | PRC1: 胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體 0.1ml |
Anti-NR1/NMDAR1/FITC 熒光素標(biāo)記谷受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | FABP(brain) (Fatty acid-binding protein brain) 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原 0.5mg |
IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗雞IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml | MUSK: 肌肉骨骼受體酪酸激酶抗體 0.1ml |
C10ORF54 Others Human 人 B7-H5 / Gi24 / VISTA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CRT(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-sp | IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HCC94(人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化)) 5×106cells/瓶×2 肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | SIRPG Others Cynomolgus 食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0922 人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | SW 1088[SW-1088;SW1088]細(xì)胞,,人腦星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞 人腎癌細(xì)胞,OS-RC-2細(xì)胞 氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
HUM, 正常人主動脈平滑肌細(xì)胞 | 兔附睪上皮原代細(xì)胞PRC1: 胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體 0.1ml |
Jurkat E6-1細(xì)胞,,人T細(xì)胞淋巴瘤 人癌細(xì)胞,4T1細(xì)胞 上皮細(xì)胞生長添加物-2EpiCGS-2 | 人結(jié)直腸癌細(xì)胞;T84 |
小鼠畸胎瘤細(xì)胞;F9 | LILRB1 Others Human 人 LILRB1 / CD85 / ILT2 / ILR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H2087(人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞) | Anti-IL-17RC/IL-17RL/FITC 熒光素標(biāo)記白介素17受體C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Anti-S100A1 S100A1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml | 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC-GFP 小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Rhesus antibody Rh phospho-ITGB3(Tyr785) 0酸化整合素β3抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KIF4A 沉默驅(qū)動蛋白KIF4A抗體 規(guī)格 0.2ml |
Annexin A2 human c ELISA Kit 人膜粘連蛋白 Ⅱ ELISA 試劑盒 96T | C10ORF54 Others Human 人 B7-H5 / Gi24 / VISTA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán),。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。