詳細(xì)介紹
兔肺微血管平滑肌原代細(xì)胞
兔肺微血管平滑肌細(xì)胞分離自肺組織,;肺是機(jī)體的呼吸器官,,位于胸腔,,左右各一,,覆蓋于心之上,。肺有分葉,,左二右三,共五葉,。肺經(jīng)肺系(指氣管,、支氣管等)與喉、鼻相連,,故稱喉為肺之門戶,,鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細(xì)胞貼壁伸展,,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,核卵圓形,、居中,;2周后細(xì)胞匯合,,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,,有分枝狀突起,,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏,;細(xì)胞密度低時,,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。肺血管平滑肌細(xì)胞主要功能:①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)(ICAM-1和VCAM-1)參與血管壁炎癥反應(yīng);②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細(xì)胞,。肺血管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化:①平滑肌增生易致肺動脈高壓,;②先天性肺動脈狹窄;③肺動脈栓塞,。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素,,新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng),并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān),。
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Microvascular Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 肺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8341 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔肺微血管平滑肌細(xì)胞
組織來源:肺
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔肺微血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte | NIS: 轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MBNL3 毒蕈堿樣蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSHR(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
SRF(Serum response factor) 血清應(yīng)答因子抗原 0.5mg | Anti-P16 抑癌基因p16抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
Anti-GAPDH/FITC 熒光素標(biāo)記3-0酸甘油醛脫氫酶IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC14A1/RACH1 尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho-FAK (Tyr925) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠0酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Anti-ATF6/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-sp NA | PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
MDA-MB-436(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 L929(成纖維細(xì)胞) | TEK Others Cynomolgus 食蟹猴 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IgG3 Others Mouse 小鼠 IgG3-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
II型肺泡上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | 兔肺微血管平滑肌原代細(xì)胞Anti-P16 抑癌基因p16抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
ITK Others Mouse 小鼠 ITK Kinase (aa 351-619) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | LCN2 Others Human 人 LCN2 / NGAL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
狗腎細(xì)胞;Super Tube 胚胎成纖維細(xì)胞,,3T6-Swiss albino細(xì)胞 Hed68細(xì)胞,,果子貍腎上皮細(xì)胞 | GIMAP7: GTP酶IMAP家族成員7抗體 0.2ml |
Human thrombomodulin,TM ELISA Kit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | ALCAM Others Rat 大鼠 ALCAM / CD166 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
纖毛蛋白-2抗體 Anti-NRP-2 0.1ml | E3 ELISA Kit 大鼠雌三醇 96T |
phospho-ATM(Ser1981): 0酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml | TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。