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詳細介紹
兔肺動脈平滑肌原代細胞
兔肺動脈平滑肌細胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干,。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈,。肺動脈起于右心室,，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左,、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺,。肺動脈干位于心包內(nèi),，為一粗短的動脈干,。起自右心室,，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左,、右肺動脈,。左肺動脈較短,，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上,、下葉。右肺動脈較長而粗,，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行,，至右肺門處分為三支進入右肺上、中,、下葉。肺動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細胞之一,，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學特征,，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明,，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓,，即缺氧性肺動脈高壓,，推斷缺氧可能是通過促進肺動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展,。肺動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞,。肺動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓,；②先天性肺動脈狹窄,；③肺動脈栓塞,。
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 肺動脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7754 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔肺動脈平滑肌細胞
組織來源：肺動脈
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔肺動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔肺動脈平滑肌采用蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔肺動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
ECV-304細胞,，人臍靜脈內(nèi)皮細胞 銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌) 人真皮成纖維細胞-總RNAHDF-a NA | ADAM12： 去整合素樣金屬蛋白酶12抗體 0.2ml |
Anti-HRG-alpha Heregulin α蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh A2AR/Adenosine A2a receptor 腺苷A2A受體抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-CCL1/I-309/TCA3/FITC 熒光素標記嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh Hyp/hydroxyproline 羥抗體 規(guī)格 0.2ml |
IDE 胰島素降解酶(抗原) 0.5mg | Phospho-HSL (Ser865)： 0酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.1ml |
IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的驢抗羊IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh factor XIII 13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子) 規(guī)格 0.2ml |
R 1610(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 | 大鼠肝細胞;BRL 3A |
HPAC細胞,，人胰腺腺泡上皮癌 人舌癌細胞,T6細胞 雜交瘤(B類);C3110D2E11 | JEG-3(人絨毛膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠內(nèi)臟脂肪細胞培養(yǎng)基 100mL | IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽) |
原代骨細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml | OSM Protein Mouse 重組小鼠 Oncostatin M / OSM 蛋白 (His 標簽) |
Hepa1-6小鼠肝癌細胞 Mouse hepatoma cell line Hepa1-6 DMEM+10% FBS | 兔肺動脈平滑肌原代細胞Rhesus antibody Rh Hyp/hydroxyproline 羥抗體 規(guī)格 0.2ml |
人食管癌細胞;EC109 | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SHZ-88大鼠癌細胞 Breast cancer cells of SHZ-88 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 小鼠晶狀體上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
NeuroFectagen? 細胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | Rhesus antibody Rh IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml |
FFA(Mouse free fatty acids) ELISA Kit 小鼠游離脂肪酸 96T | BTC Protein Mouse 重組小鼠 BTC / Betacellulin 蛋白 (His & Fc 標簽) |
Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | Free-T3(Human Free Tri-iodothyronine Indes) ELISA Kit 人游離三碘甲狀腺原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MEGF10： 表皮生長因子樣蛋白Megf10抗體 0.2ml | R 1610(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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