詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔肺成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺組織 |
英文名稱 | Rabbit Lung Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7038 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔肺成纖維細(xì)胞分離自肺組織;肺是機(jī)體的呼吸器官,,位于胸腔,,左右各一,覆蓋于心之上,。肺有分葉,,左二右三,共五葉,。肺經(jīng)肺系(指氣管,、支氣管等)與喉、鼻相連,,故稱喉為肺之門戶,,鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),;成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán),;細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長(zhǎng),,平坦、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,,顏色淡,。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。肺成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括:構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài),合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán),。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS | Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) 0酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
PLC(Human Phospholipase C) ELISA Kit 人0酯酶C 96T | Anti-MMP-17/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thy-1/CD90/ Thy1.1 CD90抗體 規(guī)格 0.1ml | Human Nephrin ELISA Kit 人蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
HOXA6: 同源盒基因HOXA6蛋白抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin C 組織蛋白酶C抗體 規(guī)格 0.1ml |
FPGT: 巖藻糖10酸鳥(niǎo)苷酰轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml | CT ELISA Kit 大鼠降鈣素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
人胚胎絨毛細(xì)胞(HAF)(1×106 ) | BC-021(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP |
人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝臟總RNAHMSC-hp NA | B3G2 Others Human 人 B3G2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
REG4 Others Human 人 REG4 / RELP / GISP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | IL13 Others Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
PRMT5 Others Human 人 PRMT5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HBdSMC Pellet 人膀胱平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人腦膜細(xì)胞cDNAHMC cDNA |
KM小鼠腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422 | 兔肺成纖維原代細(xì)胞Human Nephrin ELISA Kit 人蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 豚鼠心肌細(xì)胞;GP-H1 |
TE-1(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | HS68細(xì)胞,,人男性正常細(xì)胞系 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞,RBL-1細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM |
CD2 Others Canine 狗 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-Rad17/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Ovalbumin: 雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體 0.1ml | MICB Others Human 人 MICB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SOX11: 轉(zhuǎn)錄因子SOX-11蛋白抗體 0.2ml | C9orf75: 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | 人胚胎絨毛細(xì)胞(HAF)(1×106 ) |