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詳細介紹
兔大隱靜脈內(nèi)皮原代細胞
兔大隱靜脈內(nèi)皮細胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端,，經(jīng)內(nèi)踝前方,，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方,，進入大腿內(nèi)側(cè)部,，與股內(nèi)側(cè)皮伴行，逐漸向前上,，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔,，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點,。有5條屬支：旋髂淺靜脈,、腹壁淺靜脈、外靜脈,、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈,，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富,。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時,，須分別結(jié)扎、切斷各屬支,，以防復(fù)發(fā),。大隱靜脈內(nèi)皮細胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用,。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子,、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子,；大隱靜脈內(nèi)皮細胞還釋放控制細胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。
英文名稱 | Rabbit Great Saphenous Vein Endothelial Cells | 組織來源 | 大隱靜脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8335 |
細胞形態(tài) | 內(nèi)皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔大隱靜脈內(nèi)皮細胞
組織來源：大隱靜脈
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔大隱靜脈內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的兔大隱靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔大隱靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤;M5076 | GR ELISA Kit 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
phospho-Caseine Kinase 1 alpha(Tyr294)： 0酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗體 0.1ml | GABARAP： γ-基受體相關(guān)蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEA(C3) 癌胚抗原單克隆抗體(包被) 規(guī)格 0.1ml | PLEKHM2： 血小板白細胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml |
Anti-NQO1/FITC 熒光素標記醌氧化還原酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospho-FAK(pTyr577) 0酸化粘著斑激酶抗原 0.5mg |
IgM/Gold 金標記兔抗IgM (10或15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml | 2-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml |
NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha (EGF Domain) 人細胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人間充質(zhì)干細胞-骨髓總RNAHMSC-bm NA | PARP1 Others Mouse 小鼠 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
FGF9 Others Human 人 FGF9 人細胞裂解液 (陽性對照) | PROCR Others Mouse 小鼠 Epcr / PROCR 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Promocell C-28020 Hematopoietic ProgenitorMedium, 造血祖細胞培養(yǎng)基(即用型) 100ml | 牛源細胞 肝癌細胞,，HCCLM3細胞 C3細胞,，小鼠白血病細胞 |
KM小鼠子瘤株;U14 | 兔大隱靜脈內(nèi)皮原代細胞PLEKHM2： 血小板白細胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml |
斑馬魚尾鰭細胞;AB.9 人肝癌細胞，SNU-182細胞 HEp-2(喉表皮樣癌細胞) | 人結(jié)膜成纖維細胞cDNAHConF cDNA |
PIEC 豬髖動脈內(nèi)皮細胞 | COLEC12 Others Cynomolgus 食蟹猴 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
CSH1 Others Human 人 CSH1 / Lactogen 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-17/PE 熒光素PE標記白介素-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Runx3 Runx3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | CM-R027大鼠食管上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
Rhesus antibody Rh phospho-PLB(Ser16) 0酸化心臟0蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus) 基爾曼氏細小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端 規(guī)格 1ml |
bFGF (Rabbit basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 兔子堿性成纖維細胞生長因子 96T | NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha (EGF Domain) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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