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詳細(xì)介紹
兔腸靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
兔腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腸靜脈,；腸道指的是從胃幽門至門的消化管,。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段,。哺乳動物的腸包括小腸,、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的,，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外,。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分,，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng),。
英文名稱 | Rabbit Intestinal Vein Endothelial Cells | 組織來源 | 腸 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8327 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：腸
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
LLC-MK2細(xì)胞,，恒河猴腎細(xì)胞 人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,RKO-E6細(xì)胞 CM-H117人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | HK(Mouse Hexokinase) ELISA KIT 小鼠己糖激酶 96T |
RNF70： 環(huán)指蛋白70抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PTRF RNA聚合酶1和轉(zhuǎn)錄釋放因子抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HER2 receptor(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記抗c-erbB-2受體抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CLK2： 細(xì)胞分裂周期樣激酶2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BPIL3 殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體 規(guī)格 0.2ml | anti-CXCL10/IP-10 /FITC 熒光素標(biāo)記CXCL10趨化因子10/干擾素誘導(dǎo)蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
肝素結(jié)合生長因子/酸性成纖維細(xì)胞生長因子抗體 Anti-FGF1/aFGF/ECGF-beta/HBGF-1 0.1ml | ABCF2： ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 0.2ml |
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK | HMy2.CIR 人 B 淋巴母細(xì)胞 |
CM-R011大鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 |
大鼠小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IFNB1 Protein Human 重組人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
人胚皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-ESF-1 | CL-0111HL-7702(人肝正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
SNU-638人胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells SNU-638 1640+10% FBS | 兔腸靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞CLK2： 細(xì)胞分裂周期樣激酶2抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;Vero E6 | CM-H091人大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
AXL Others Human 人 Axl Kinase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 牛腎細(xì)胞;MDBK |
人胚腎二倍體細(xì)胞;CCC-HEK-1 | IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRM2/GLUR2 促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格 0.1ml | 人絨毛間葉成纖維細(xì)胞總RNAHVMF NA |
EPHB3/Eph receptor B3： 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪酸激酶B3抗體 0.1ml | Anti-LY-86/MD-1 MD-1蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit 小鼠上皮粒細(xì)胞活化肽78Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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